BD, 557825, Kit ELISA de proteína C reactiva [PCR] de rata BD™

Aplicación: ELISA (probado durante el desarrollo)
Estado regulatorio: RUO
Descripción: Descripción Materiales proporcionados Microplaca recubierta con anticuerpo de captura Una placa de 96 pocillos rompibles recubiertos con un anticuerpo de conejo anti-PCR de rata Anticuerpo de detección/Conjugado enzimático (100x) 120 µL de peroxidasa de rábano picante concentrada (HRP) conjugada con un anticuerpo de conejo anti-PCR de rata que contiene estabilizadores y conservante. Proteger de la luz. Estándar (10x) 250 µL de suero de rata con niveles elevados de PCR. Tampón de lavado Un paquete de solución salina tamponada con fosfato (PBS) en polvo con Tween-20 al 0,05%. Reconstituir con 1L de agua destilada. Sustrato TMB Una solución de 12 mL que contiene 3,3',5,5'-tetrametilbencidina (TMB) suministrada en una botella opaca protectora. Proteger de la luz. Solución de parada 12 mL de ácido fosfórico diluido, listo para usar. El kit ELISA para proteína C reactiva (PCR) de rata está diseñado para la detección y cuantificación de PCR en suero de rata. La PCR es una proteína de fase aguda producida por el hígado durante procesos inflamatorios, infecciones bacterianas o traumatismos tisulares. La cuantificación de la PCR puede ser útil para la determinación de afecciones inflamatorias que, de otro modo, serían difíciles de detectar y monitorizar. Principio del ensayo: El ELISA BD™ para PCR de rata es un ELISA sándwich en fase sólida (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas). Utiliza un anticuerpo específico para PCR de rata recubierto en una placa de 96 pocillos. Se añaden estándares o muestras a los pocillos, y la PCR presente se une al anticuerpo inmovilizado. Tras la incubación adecuada, se lavan los pocillos y se añade un anticuerpo anti-PCR de rata conjugado con peroxidasa de rábano picante para producir un "sándwich" anticuerpo-antígeno-anticuerpo. Tras otro periodo de incubación, se lavan de nuevo los pocillos y se añade una solución de sustrato, que produce un color azul directamente proporcional a la cantidad de PCR presente en la muestra inicial (el desarrollo de un color azul indica una reacción positiva, mientras que las reacciones negativas aparecen incoloras). La reacción se interrumpe con la solución de parada, que cambia el color de azul a amarillo (las reacciones negativas permanecen incoloras o ligeramente amarillas). A continuación, se mide el color a una longitud de onda de 450 nm (absorbancia) en un espectrofotómetro o en un lector ELISA.
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. Los componentes del kit deben alcanzar la temperatura ambiente (20-25 °C) antes de abrir los frascos y las bolsas de las placas. Espere al menos 30 minutos para este proceso. No utilizar el kit después de la fecha de caducidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Recolección y manipulación de muestras: Las muestras deben ser transparentes, no hemolizadas ni lipémicas. Las muestras de sangre deben recolectarse mediante técnicas de venopunción aprobadas. Deje que las muestras coagulen y separe el suero mediante centrifugación. Como alternativa, utilice un tubo separador de suero (BD Vacutainer, n.° de cat. 366430) y deje que las muestras coagulen durante 30 minutos; luego, centrifugue durante 10 minutos a 1000 x g. Retire el suero y analice inmediatamente o almacene las muestras a ≤ -20 °C. Evite congelar y descongelar repetidamente las muestras. Materiales adicionales necesarios: 1. Agua destilada o desionizada 2. Probeta de un litro 3. Frasco lavador o lavadora automática 4. Pipetas de precisión 5. Tubos o placa de microtitulación para preparar diluciones estándar 6. Selladores de placa o parafilm 7. Cronómetro de laboratorio 8. Papel milimetrado o software de reducción de datos automática 9. Lector de microplacas capaz de medir la absorbancia a 450 nm Procedimiento de ensayo: 1. Prepare el tampón de lavado disolviendo 1 paquete de PBS en polvo en 1 L de agua destilada. 2. Prepare el estándar de PCR diluyendo 1:10 el estándar madre 10x proporcionado. Después, realice diluciones seriadas 1:2 cinco veces. Consulte la figura con el esquema de dilución. Por ejemplo, para preparar el estándar para un pocillo: Estándar n.º 1: diluir el estándar madre 1:10 (es decir, 24 µL de estándar madre 10x mezclado con 216 µL de tampón de lavado) Estándar n.º 2: diluir el estándar n.º 1 1:2 (es decir, 120 µL del estándar n.º 1 mezclado con 120 µL de tampón de lavado) Estándar n.º 3: diluir el estándar n.º 2 1:2 (es decir, 120 µL del estándar n.º 2 mezclado con 120 µL de tampón de lavado) Estándar n.º 4: diluir el estándar n.º 3 1:2 (es decir, 120 µL del estándar n.º 3 mezclado con 120 µL de tampón de lavado) Estándar n.º 5: diluir el estándar n.º 4 1:2 (es decir, 120 µL del estándar n.º 4 mezclado con 120 µL de tampón de lavado) Estándar n.º 6: diluir el estándar n.º 5 1:2 (es decir, 120 µL del Estándar #5 mezclado con 120 µL de Buffer de Lavado) 3. Las muestras de suero probablemente necesitarán ser diluidas antes de la prueba y una titulación de la muestra es muy recomendable. La dilución sugerida para suero de rata es 1:4000 (es decir, 2 µL de suero en 2 mL de buffer de lavado para una dilución de 1:1000. Luego, agregue 100 µL del suero diluido y agregue a 300 µL de buffer de lavado para una dilución de 1:4 para dar la dilución de trabajo final de 1:4000). 4. Agregue 100 µl a cada pocillo e incube a temperatura ambiente durante 30 minutos. 5. Lave la placa 4-5 veces con un chorro suave de buffer de lavado de una botella de lavado o un lavador de placas. Golpee las placas sobre una pila de toallas de papel absorbente para eliminar el buffer residual. 6. Prepare una concentración de trabajo 1x del conjugado de anticuerpo de detección/enzima diluyendo el conjugado de anticuerpo de detección/enzima 100x proporcionado 1:100 con tampón de lavado (p. ej., agregue 50 µL de conjugado de anticuerpo de detección/enzima 100x a 5 mL de tampón de lavado). 7. A cada micropocillo que se esté probando, agregue 100 µl del conjugado de anticuerpo de detección/enzima 1x. 8. Cubra la placa e incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 9. Lave la placa como se describe en el paso 5. 10. Agregue 100 µL de solución de sustrato TMB e incube de 5 a 10 minutos a temperatura ambiente. 11. Detenga la reacción agregando 100 µL de solución de parada. 12. Lea la absorbancia a 450 nm dentro de los 30 minutos de detener la reacción. Si la corrección de longitud de onda está disponible, la absorbancia a 630 nm puede restarse de la absorbancia a 450 nm. 13. El estándar stock 10x proporcionado representa suero prediluido. Para determinar las concentraciones de PCR de la muestra, multiplique los valores medidos por el factor de dilución utilizado (4000 si se realizó una dilución de 1:4000) para tener en cuenta la dilución durante la preparación de la muestra. Limitaciones del procedimiento: 1. El kit BD™ ELISA Rat CRP está diseñado para usarse como una unidad integral. No mezcle reactivos de diferentes lotes del kit. 2. Las muestras que generen valores de absorbancia superiores a la curva estándar deben diluirse y volver a analizarse. Ocasionalmente, puede encontrarse un exceso de antígeno en suero con valores altos de PCR. En esta situación, es posible que toda la PCR disponible no haya reaccionado con el anticuerpo de detección y puede ser necesario analizar el suero a diluciones más altas (p. ej., 1:8000, 1:16000 o 1:64000). 3. No se ha investigado exhaustivamente la interferencia de los metabolitos de los fármacos, los receptores solubles ni otras proteínas de unión en las muestras. No se puede excluir la posibilidad de interferencia. 4. No utilice los componentes después de la fecha de caducidad. Manipule todas las muestras de suero y plasma de acuerdo con las directrices del NCCLS para prevenir la transmisión de infecciones transmitidas por la sangre. El suero de control no ha sido analizado para detectar agentes infecciosos. Dado que ninguna prueba puede asegurar la ausencia completa de agentes infecciosos, las muestras de suero y el equipo que entre en contacto con estas muestras deben manipularse con buenas prácticas de laboratorio. Advertencia: El polvo tampón de lavado PBS-T (componente 51-915X001) contiene 75,8 % de cloruro de sodio (p/p) y 1,9 % (p/p) de cloruro de potasio (p/p). Indicaciones de peligro Puede ser nocivo si se ingiere. Declaraciones de precaución Llame a un CENTRO DE TOXICOLOGÍA/médico si se siente mal. Peligro: La solución de parada (componente 51-946P001) contiene 15,23 % de ácido fosfórico (p/p). Indicaciones de peligro: Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. Consejos de precaución: Llevar guantes/protección ocular. Llevar ropa de protección. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL (o el pelo): Quitarse inmediatamente la ropa contaminada. Enjuagarse la piel con agua/ducharse. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando. EN CASO DE INHALACIÓN: Transportar a la víctima al exterior y mantenerla en reposo en una posición confortable para respirar. Eliminar el contenido/el recipiente de conformidad con la normativa local/regional/nacional/internacional.
Avisos del producto: Avisos del producto La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos.