BD, 572434, Panel de proteínas de células NK BD® OMICS-One

Reactividad: Humana (Probada en desarrollo)
Solicitud: Secuenciación de 3' de células individuales (calificada)
Estado regulatorio: RUO
Descripción: Descripción El panel de proteínas de células NK BD ® OMICS-One consta de 30 especificidades diferentes contra los principales marcadores de células NK en un solo tubo. Diseñado y optimizado para funcionar en el sistema BD Rhapsody™, el panel de proteínas de células NK está probado para funcionar a la perfección junto con el ensayo de análisis del transcriptoma completo (WTA) BD Rhapsody™, el ensayo de ARNm dirigido, el kit de multiplexación de células individuales BD ® (SMK), el ensayo CITE-seq intracelular (IC-AbSeq) BD ® y el ensayo multiómico TCR/BCR Next BD Rhapsody™ para humanos. Cada anticuerpo individual se conjugó con un oligonucleótido que contiene una secuencia de código de barras de anticuerpo específica flanqueada por una cola de poliA en el extremo 3' y un asa de PCR común (sitio de unión del cebador de PCR) en el extremo 5'. Todas las secuencias de código de barras AbSeq se generaron in silico con una similitud mínima con los genomas humanos, presentan una estructura secundaria predicha baja y una distancia de Hamming alta dentro del portafolio de anticuerpos-oligos de BD, lo que permite la corrección de errores de secuenciación y un mapeo único. La cola de poliA del oligonucleótido permite que la secuencia de código de barras sea capturada por las perlas de captura celular mejoradas BD Rhapsody™. El asa de PCR de 5' permite una generación eficiente de bibliotecas para diversas plataformas de secuenciación. Cada anticuerpo individual se encuentra en una concentración óptima dentro del plexo de 30, lo que permite una resolución superior tanto del objetivo como de la población. El panel de proteínas de células NK está diseñado con tecnología SMART. Esta tecnología ayuda a reducir el coste de secuenciación y a aumentar la resolución de los datos al atenuar los anticuerpos dirigidos a marcadores primarios de alta expresión y permitir la reasignación de lecturas de secuenciación a marcadores expresados ​​a niveles más bajos. Con la tecnología SMART, los marcadores de baja expresión pueden cuantificarse sin necesidad de realizar una secuenciación más profunda ni incurrir en un coste elevado. Las dos especificidades atenuadas en el panel de proteínas de células NK son CD2 y CD31.
Preparación y almacenamiento: Conservar a 2-8 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Este reactivo se proporciona liofilizado en un formato pretitulado. 1. Retire el tubo BD ® OMICS-One NK-Cell Protein Panel de la bolsa de aluminio y deje que alcance la temperatura ambiente durante 5 minutos. 2. Asegúrese de que el pellet se encuentre en el fondo del tubo. De lo contrario, centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo del tubo. 3. Añada 35 µL de agua libre de nucleasas al fondo del tubo y deje que los anticuerpos se reconstituyan durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Coloque los anticuerpos reconstituidos en hielo hasta que las células estén listas para la tinción. Nota: Reconstituya el anticuerpo inmediatamente antes de la tinción celular. La incubación prolongada del anticuerpo reconstituido puede aumentar el fondo no específico. 5. Para BD ® AbSeq Ab-Oligo drop-in de 60 plex o inferior, prepare el BD ® AbSeq labeling MasterMix en un tubo LoBind de 1,5 mL en hielo. Nota: Para drop-in con más de 60 plex, comuníquese con el soporte técnico para realizar el cálculo. Para el etiquetado secuencial con etiquetas de muestra o sin etiquetas de muestra, prepare BD ® AbSeq labeling MasterMix para drop-ins de la siguiente manera: ____________________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL) 1 muestra + 2 muestras + 30 % de exceso (µL) 30 % de exceso (µL) Por BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 2,6 5,2 Total de BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 × N* 2,6 × N 5,2 × N FBS † (número de catálogo 554656) 70 – (2,0 x N) 91 – (2,6 x N) 182 – (5,2 x N) Total 70 91 182 Para el etiquetado conjunto con etiquetas de muestra, prepare BD® AbSeq labeling MasterMix para drop-ins de la siguiente manera: ____________________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL) 1 muestra + 2 muestras + 30% de exceso (µL) 30% de exceso (µL) Por BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 2,6 5,2 Total de BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 × N* 2,6 × N 5,2 × N FBS † (número de catálogo 554656) 120 – (2,0 × N) 156 – (2,6 × N) 312 – (5,2 × N) Total 120 156 312 * N = número de anticuerpos de inserción directa. N = 0 si no hay anticuerpos de inserción directa. † FBS = tampón de tinción BD Pharmingen™. 6. Pipetee la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para gotas. Centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo y vuelva a colocar en hielo. 7. Si se realiza un etiquetado secuencial con etiquetas de muestra o sin etiquetas de muestra, para cada muestra, añada 140 μL de la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq de gotas al tubo que contiene 35 μL de solución reconstituida del panel de proteínas de células NK para completar un volumen total de 175 μL. Si se realiza un etiquetado conjunto con etiquetas de muestra, para cada muestra, añada 120 μL de la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq de gotas y 20 μL de etiqueta de muestra al tubo que contiene 35 μL de solución reconstituida del panel de proteínas de células NK para completar un volumen total de 175 μL. 8. Pipetee la mezcla, centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo del tubo y vuelva a colocar en hielo. 9. Centrifugue las células a 400 × g durante 5 minutos. Si utiliza el bloque Fc, continúe con el paso 10. Si no lo utiliza, vaya al paso 11. 10. (Opcional) Para muestras que contengan linfocitos mieloides y linfocitos B, recomendamos bloquear las señales de falsos positivos mediadas por el receptor Fc inespecífico con el bloque Fc Human BD (número de catálogo 564220). Para realizar el bloqueo, pipetee el Fc Block MasterMix en un tubo LoBind nuevo de 1,5 mL en hielo: _________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL)* 1 muestra + 20 % de exceso (µL) FBS† (número de catálogo 554656) 20,0 24,0 Fc Block‡ (número de catálogo 564220) 5,0 6,0 Total 25,0 30,0 * Suficiente para hasta 1 millón de células. Para bloquear más células, ajuste el volumen. † FBS = tampón de tinción BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. b. Pipetee y mezcle el Fc Block MasterMix y centrifugue brevemente. Coloque en hielo. c. Retire el sobrenadante de las células sin alterar el sedimento. d. Resuspenda las células en 25 µL de Fc Block MasterMix. e. Incube las células a temperatura ambiente (15 °C a 25 °C) durante 10 minutos. f. Añada 175 µL de BD® AbSeq labeling MasterMix del paso 8 a la suspensión celular. Pipetee y mezcle y proceda al paso 12. 11. Retire el sobrenadante de las células sin alterar el pellet. Añada 25 µL de tampón de tinción (FBS) a los 175 µL de BD® AbSeq labeling MasterMix del paso 8 para completar un volumen total de 200 µL. Resuspenda el pellet celular en un volumen total de 200 µL. Pipetee y mezcle. 12. Transfiera las células con BD® AbSeq labeling MasterMix a un nuevo tubo Falcon de poliestireno de 5 mL. 13. Teñir las células en hielo durante 30 minutos. 14. Añada 3-4 mL de tampón de tinción (FBS) a las células marcadas y mezcle con la pipeta. 15. Centrifugue a 400 xg durante 5 minutos. 16. Destape el tubo e inviértalo para decantar el sobrenadante en residuos biopeligrosos. Mantenga el tubo invertido y seque suavemente con una toallita sin pelusa para eliminar el sobrenadante residual del borde del tubo. 17. Repita los pasos 14-16 dos veces más para un total de tres lavados. 18. Resuspenda el sedimento celular lavado final en 620 µL de tampón de muestra frío del reactivo de cartucho mejorado BD Rhapsody™ V3 (número de catálogo 667052) y proceda a la captura de células individuales con el lavado en el cartucho descrito en los subpasos a-c. Consulte el Protocolo de Captura de Células Individuales y Síntesis de ADNc del Sistema de Análisis de Células Individuales BD Rhapsody™ HT (Doc ID 23-24252) o el Protocolo de Captura de Células Individuales y Síntesis de ADNc del Sistema BD Rhapsody™ HT Xpress (Doc ID 23-24253) para obtener más información. Nota: Realice el lavado en el cartucho después de la sedimentación celular (incubación de 8 minutos) de la siguiente manera: a. En la sección del protocolo "Carga de células en el Cartucho de 8 Carriles BD Rhapsody™", después de la carga celular, incube el cartucho en oscuridad a temperatura ambiente durante 8 minutos. b. Coloque el cartucho en el BD Rhapsody™ HT Xpress y realice los pasos de lavado en el cartucho que se enumeran a continuación: _____________________________________________________________ Material para cargar Volumen (µL) 1 carril Modo de pipeta Aire 380 Cebado/lavado Tampón de muestra fría 380 Cebado/lavado Aire 380 Cebado/lavado Tampón de muestra fría 380 Cebado/lavado c. (Opcional) Realice el paso del escáner: Escaneo de carga celular, si utiliza el protocolo de captura de células individuales y síntesis de ADNc del sistema de análisis de células individuales BD Rhapsody™ HT (ID de documento 23-24252). No es necesario un retraso de 8 minutos antes del escaneo. Advertencia: Todas las muestras y materiales biológicos se consideran biopeligrosos. Manéjelos como si fueran capaces de transmitir infecciones y deséchelos utilizando las precauciones adecuadas de acuerdo con las regulaciones federales, estatales y locales. Nunca pipetee con la boca. Use ropa, gafas y guantes de protección adecuados. Lista de las 30 especificidades AbSeq humanas incluidas en el panel de células T BD® OMICS-One: _____________________________________________________________________________ Especificidad Clon Oligo ID Código de barras BD® AbSeq Secuencia CD11b M1/70 AHS0005 ATCGTTATTCGTTGTAGTTCGCCCGGTTTGAGTAGT CD56 NCAM16.2 AHS0019 AGAGGTTGAGTCGTAATAATAATCGGAAGGCGTTGG CD38 HIT2 AHS0022 GTCAACGATGGGTAGCGGTAGAAATAACGGAACTGG CD27 M-T271 AHS0025 TGTCCGGTTTAGCGAATTGGGTTGAGTCACGTAGGT CD2 RPA-2.10 AHS0029 AAACGTAGATTAGAGCCGGGTATGTCGCAACTGATT CD16 3G8 AHS0053 TAAATCTAATCGCGGTAACATAACGGTGGGTAAGGT CD184 (CXCR4) 12G5 AHS0060 CAGTGTTTAGAGCGGGTTGCATATGTCGTTTAGAGG CD49d 9F10 AHS0063 TAGGGTGACTTAGCGATTGATGCGTATGTTTGGGCG CD314 (NKG2D) 1D11 AHS0065 TTGAAATGCGATGAGACGTAGAGCGATGTAGGTAGC CD335 (NKP46) 9E2/NKP46 AHS0068 CAATTTGTTCGCGTTTAGTAGTCGTCGTCTTATGGG CD54 HA58 AHS0076 AAGAGAATATATGCGTGCGTTGTTAAGGGAATGCGT CD226 DX11 AHS0079 GAGTTTATGATTCGTTTCTTCGGTAGTTCGTCGCTT CD94 HP-3D9 AHS0085 GAGGTTAGGATAGGTGTACGGGTCGAGTTGAATTCT CD336 (NKP44) p44-8 AHS0090 AATGCAAACGATATCACGAAGGGTAGTACACGACGG CD49a SR84 AHS0101 ATGACACGAATGCGACGAGAGGCGAAATAGGTTGGT CX3CR1 2A9-1 AHS0125 GGGTTCACGAGGTTTAAAGCGGTAGTATAGGATGCC CD122 Mik-β3 AHS0146 TTAAAGAGATTCGTGGGTATTGGCGCAGTCATTCCT CD140b (PDGFR) 28D4 AHS0151 GACAACATTTAGGACGTGACGAGAGAGTATAGCTTC CD248 B1/35 AHS0156 ATCACTTATTTCGTTTGGAGGGTTCGTAGGCGTTGC CD63 H5C6 AHS0157 TGCAGCGTTAGGACCAAGCGTTTACCGTAGAATATT CD140a α-R1 AHS0160 TTACTGACTTTCGGACGTTGGTTACTTAGGGTTATG CD31 (PECAM1) WM59 AHS0170 CTAAGGGACGTAATTGAGTTTCGGTGATCGCAGTTT CD96 6F9 AHS0194 CTAATGTAAGAGCGGACGTTTGGGCACTATATGTTT CD161 (KLRB1) HP-3G10 AHS0205 TTTAGGACGATTAGTTGTGCGGCATAGGAGGTGTTC CD158b (KIR) DX27 AHS0209 CGTAGGAGGATTTCGTCGATGGGTTTGTTAGCGTTC CD158e1 DX9 AHS0211 AGGTTCATTGCGGCATTAGGCGTCATATAGTAGGTG CD337/NKp30 P30-15 AHS0213 GGTAACTGACATGACGGAGCGATAATTTCTGGCGGT CD3 UCHT1 AHS0231 AGCTAGGTGTTATCGGCAAGTTGTACGGTGAAGTCG CD329(Siglec-9) E10-286 AHS0239 CGGGCGCGAAGATAGGATAATAGGTAACGTCAAATG CD106 51-10C9 AHS0251 TCTGATTTAGCGGGTGGACGTATTATAGTGATTGGC
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo se proporciona liofilizado en un formato pretitulado. El proceso de producción se sometió a rigurosas pruebas y validación para asegurar que genera un conjugado de alta calidad con un rendimiento consistente y una actividad de unión específica. Sin embargo, no se han realizado pruebas de verificación en todos los lotes de conjugado. Vaya a https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics para protocolos técnicos. Vaya a https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/ para acceder a los archivos de referencia de AbSeq en formato FASTA para análisis bioinformáticos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Siga las pautas estatales y locales al desechar residuos peligrosos. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Para conocer las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents. Lea y comprenda las fichas de datos de seguridad (FDS) antes de manipular productos químicos. Para obtener las FDS, visite regdocs.bd.com o contacte con el soporte técnico de BD Biosciences en scomix@bd.com.
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