BD, 572435, Panel de proteínas de células mieloides/APC BD® OMICS-One

Reactividad: Humana (Probada en desarrollo)
Solicitud: Secuenciación de 3' de células individuales (calificada)
Estado regulatorio: RUO
Descripción: Descripción El panel de proteínas de células mieloides/APC BD ® OMICS-One consta de 30 especificidades diferentes contra los principales marcadores de células mieloides/APC en un solo tubo. Diseñado y optimizado para funcionar en el sistema BD Rhapsody™, el panel de proteínas de células mieloides/APC está probado para funcionar a la perfección junto con el ensayo de análisis del transcriptoma completo (WTA) BD Rhapsody™, el ensayo de ARNm dirigido, el kit de multiplexación de células individuales BD ® (SMK), el ensayo CITE-seq intracelular (IC-AbSeq) BD ® y el ensayo multiómico BD Rhapsody™ TCR/BCR Next para humanos. Cada anticuerpo individual se conjugó con un oligonucleótido que contiene una secuencia de código de barras de anticuerpo específica flanqueada por una cola de poliA en el extremo 3' y un asa de PCR común (sitio de unión del cebador de PCR) en el extremo 5'. Todas las secuencias de código de barras AbSeq se generaron in silico con una similitud mínima con los genomas humanos, presentan una estructura secundaria predicha baja y una distancia de Hamming alta dentro del portafolio de anticuerpos-oligos de BD, lo que permite la corrección de errores de secuenciación y un mapeo único. La cola de poliA del oligonucleótido permite que la secuencia de código de barras sea capturada por las perlas de captura celular mejoradas BD Rhapsody™. El asa de PCR de 5' permite una generación eficiente de bibliotecas para diversas plataformas de secuenciación. Cada anticuerpo individual se encuentra en una concentración óptima dentro del plexo de 30, lo que permite una resolución superior tanto del objetivo como de la población. El panel de proteínas de células mieloides/APC está diseñado con tecnología SMART. Esta tecnología ayuda a reducir el coste de secuenciación y a aumentar la resolución de los datos al atenuar los anticuerpos dirigidos a marcadores primarios de alta expresión y permitir la reasignación de lecturas de secuenciación a marcadores expresados ​​a niveles más bajos. Con la tecnología SMART, los marcadores de baja expresión pueden cuantificarse sin necesidad de realizar una secuenciación más profunda ni incurrir en un coste elevado. Las dos especificidades atenuadas en el panel de proteínas de células mieloides/APC son CD45 y HLA-DR.
Preparación y almacenamiento: Conservar a 2-8 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Este reactivo se proporciona liofilizado en un formato pretitulado. 1. Retire el tubo BD ® OMICS-One APC/Myeloid-Cell Protein Panel de la bolsa de aluminio y deje que alcance la temperatura ambiente durante 5 minutos. 2. Asegúrese de que el pellet se encuentre en el fondo del tubo. De lo contrario, centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo del tubo. 3. Añada 35 µL de agua libre de nucleasas al fondo del tubo y deje que los anticuerpos se reconstituyan durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Coloque los anticuerpos reconstituidos en hielo hasta que las células estén listas para la tinción. Nota: Reconstituya el anticuerpo inmediatamente antes de la tinción celular. La incubación prolongada del anticuerpo reconstituido puede aumentar el fondo no específico. 5. Para BD ® AbSeq Ab-Oligo drop-in de 60 plex o menos, prepare el BD ® AbSeq labeling MasterMix en un tubo LoBind de 1,5 mL en hielo. Nota: Para drop-in con más de 60 plex, comuníquese con el soporte técnico para realizar el cálculo. Si se realiza un etiquetado secuencial con etiquetas de muestra o sin etiquetas de muestra, prepare la mezcla maestra de etiquetado BD ® AbSeq para las muestras directas de la siguiente manera: ____________________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL) 1 muestra + 2 muestras + 30 % de exceso (µL) 30 % de exceso (µL) Por BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 2,6 5,2 Total de BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 × N* 2,6 × N 5,2 × N FBS † (número de catálogo 554656) 140 – (2,0 x N) 182 – (2,6 x N) 364 – (5,2 x N) Total 140 182 364 Si se realiza un etiquetado conjunto con etiquetas de muestra, prepare la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para las muestras directas de la siguiente manera: ____________________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL) 1 muestra + 2 muestras + 30% de exceso (µL) 30% de exceso (µL) Por BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 2,6 5,2 Total de BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 × N* 2,6 × N 5,2 × N FBS † (número de catálogo 554656) 120 – (2,0 × N) 156 – (2,6 × N) 312 – (5,2 × N) Total 120 156 312 * N = número de anticuerpos de inserción directa. N = 0 si no hay anticuerpos de inserción directa. † FBS = tampón de tinción BD Pharmingen™. 6. Pipetee la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para gotas. Centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo y vuelva a colocar en hielo. 7. Si se etiqueta secuencialmente con etiquetas de muestra o sin etiquetas de muestra, para cada muestra, agregue 140 μL de la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq de gotas al tubo que contiene 35 μL de solución reconstituida de panel de proteína de células mieloides/PCA para completar un volumen total de 175 μL. Si se etiqueta conjuntamente con etiquetas de muestra, para cada muestra, agregue 120 μL de la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq de gotas y 20 μL de etiqueta de muestra al tubo que contiene 35 μL de solución reconstituida de panel de proteína de células mieloides/PCA para completar un volumen total de 175 μL. 8. Mezcle con la pipeta, centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo del tubo y vuelva a colocarlo en hielo. 9. Centrifugue las células a 400 × g durante 5 minutos. Si utiliza el Bloque Fc, continúe con el paso 10. Si no utiliza el Bloque Fc, vaya al paso 11. 10. (Opcional) Para muestras que contengan linfocitos mieloides y linfocitos B, BD Biosciences recomienda bloquear las señales de falsos positivos mediadas por el receptor Fc inespecífico con el Bloque Fc Humano BD (número de catálogo 564220). Para realizar el bloqueo, pipetee el Fc Block MasterMix en un tubo LoBind nuevo de 1,5 mL en hielo: _________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL)* 1 muestra + 20 % de exceso (µL) FBS† (número de catálogo 554656) 20,0 24,0 Fc Block‡ (número de catálogo 564220) 5,0 6,0 Total 25,0 30,0 * Suficiente para hasta 1 millón de células. Para bloquear más células, ajuste el volumen. † FBS = tampón de tinción BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. b. Pipetee y mezcle el Fc Block MasterMix y centrifugue brevemente. Coloque en hielo. c. Retire el sobrenadante de las células sin alterar el sedimento. d. Resuspenda las células en 25 μL de Fc Block MasterMix. e. Incube las células a temperatura ambiente (15 °C a 25 °C) durante 10 minutos. f. Agregue 175 μL de BD ® AbSeq labeling MasterMix del paso 8 a la suspensión celular. Pipetee, mezcle y proceda al paso 12. 11. Retire el sobrenadante de las células sin alterar el pellet. Agregue 25 μL de tampón de tinción (FBS) a los 175 μL de BD ® AbSeq labeling MasterMix del paso 8 para completar un volumen total de 200 μL. Resuspenda el pellet celular en un volumen total de 200 μL. Pipetee, mezcle. 12. Transfiera las células con BD ® AbSeq labeling MasterMix a un nuevo tubo Falcon de poliestireno de 5 mL. 13. Teñir las células en hielo durante 30 minutos. 14. Añada 3-4 mL de tampón de tinción (FBS) a las células marcadas y mezcle con la pipeta. 15. Centrifugue a 400 × g durante 5 minutos. 16. Destape el tubo e inviértalo para decantar el sobrenadante en residuos biopeligrosos. Mantenga el tubo invertido y seque suavemente con una toallita sin pelusa para eliminar el sobrenadante residual del borde del tubo. 17. Repita los pasos 14 a 16 dos veces más para un total de tres lavados. 18. Resuspenda el sedimento celular lavado final en 620 µL de tampón de muestra frío del reactivo de cartucho mejorado BD Rhapsody™ V3 (número de catálogo 667052) y proceda a la captura de células individuales con el lavado en el cartucho descrito en los subpasos a–c. Consulte el Protocolo de Captura de Células Individuales y Síntesis de ADNc del Sistema de Análisis de Células Individuales BD Rhapsody™ HT (Doc ID 23-24252) o el Protocolo de Captura de Células Individuales y Síntesis de ADNc del Sistema BD Rhapsody™ HT Xpress (Doc ID 23-24253) para obtener más información. Nota: Realice el lavado en el cartucho después de la sedimentación celular (incubación de 8 minutos) como se describe en los siguientes subpasos. a. En la sección del protocolo "Carga de células en el Cartucho de 8 Carriles BD Rhapsody™", después de la carga celular, incube el cartucho en oscuridad a temperatura ambiente durante 8 minutos. b. Coloque el cartucho en el BD Rhapsody™ HT Xpress y realice los pasos de lavado en el cartucho de la siguiente manera: _____________________________________________________________ Material para cargar Volumen (µL) 1 carril Modo de pipeta Aire 380 Cebado/lavado Tampón de muestra fría 380 Cebado/lavado Aire 380 Cebado/lavado Tampón de muestra fría 380 Cebado/lavado c. (Opcional) Realice el paso del escáner: Escaneo de carga celular, si utiliza el protocolo de captura de células individuales y síntesis de ADNc del sistema de análisis de células individuales BD Rhapsody™ HT (ID de documento 23-24252). No es necesario un retraso de 8 minutos antes del escaneo. Advertencia: Todas las muestras y materiales biológicos se consideran biopeligrosos. Manéjelos como si fueran capaces de transmitir infecciones y deséchelos utilizando las precauciones adecuadas de acuerdo con las regulaciones federales, estatales y locales. Nunca pipetee con la boca. Use ropa, gafas y guantes de protección adecuados. Lista de las 30 especificidades AbSeq humanas incluidas en el panel de células T BD® OMICS-One: ______________________________________________________________________________ Especificidad Clon Oligo ID BD® AbSeq Código de barras Secuencia___________ CD103 BER-ACT AHS0001 AAATAGTATCGAGCGTAGTTAAGTTGCGTAGCCGTT CD274 (PD-L1) MIH1 AHS0004 ATCGTAAGGCTCGTGGTTCGTAAGTAAGTTCGTATC CD11b M1/70 AHS0005 ATCGTTATTCGTTGTAGTTCGCCCGGTTTGAGTAGT CD123 7G3 AHS0020 ACAGTTTAGTAGGACGTGAGGTATCGCGAGAATGCC HLA-DR G46-6 AHS0035 TGTTGGTTATTCGTTAGTGCATCCGTTTGGGCGTGG CD14 MPHIP9 AHS0037 TGGCCCGTGGTAGCGCAATGTGAGATCGTAATAAGT CD45 HI30 AHS0040 GTGCGAAATGGCGGAATGTTATCTGCGAATGTAGTC CD33 WM53 AHS0044 GTGTTAGTGATTTGATAGGACGCGTTACGAGAGATT CD80 L307.4 AHS0046 GAGGGTAACGGGTGTCCAAATATCGGCTGTGTAAGT CD16 3G8 AHS0053 TAAATCTAATCGCGGTAACATAACGGTGGGTAAGGT CD64 10.1 AHS0055 TTGTGCGGCGTAGTATGGTTATCTCGAGTGAAAGTC CD11c B-LY6 AHS0056 ATGCGTTGCGAGAGATATGCGTAGGTTGCTGATTGG CD163 GHI/61 AHS0062 TATTATGTGCGAACTATGGTATCCGTATTGAGGGCT CD195 (CCR5) 2D7/CCR5 AHS0070 ATGGTTTAGTCGTACGTGGGTTTAGATTGGCGGTGC CD206 19.2 AHS0072 GCTGGTTATCGTTTGAGAGTCGGTATGGAATGCGGT CD32 FLI8.26 AHS0073 GGTTGTAGGTGCGGAATATAAGCGTCGTTGAGGTGT CD273 MIH18 AHS0075 TGAGTAACCGTATGTAATCCGTAATCGTAGAAGCGC CD141 1A4 AHS0083 TGGAAGTAAGTATGGGTCGGCGTAAATTGTGCGTGT CD1 F10/21A3 AHS0088 ATAGATTACATTCGTTTAGCGTTGGGTTCGGTCCGT CD40 5C3 AHS0117 GGTGTAATTGGGCTAGAACGTATATGCGGTAAGGCG FCeR1a AER-37 AHS0129 GATATGGCGTGATGGTAGGTTCGGTTTAAGTTAGCG CD169 7-239 AHS0133 CATTAAGCACGAAGGGTATAGGTAGGAACGGTTGGC CD36 IVC7 AHS0135 AATTGTAGTAGTCCGGTGTATGTAGAGTAGGCGTTT CD115 (CSF1R) 9-4D2-1E4 AHS0136 CTGGTGGCGGCGAATTTGGTTACGACATATAGGGTT CD162 KPL-1 AHS0139 CCAGATAGGCGATAGTTGTTAGGACGATTAGTGTG CD85K ZM3.8 AHS0179 AGTAGTCGTAGTTGGCGTGAATTGGGCTTATATCTG VISTA MIH65.RMAB AHS0187 ATCAGGGAATCTCGGTAAGTTAAACGTGTATAGTGC CD15 W6D3 AHS0196 ATAGGCATGGACGACGTAGATAATAAGTGGCGGGTT CD192 (CCR2) LS132.1D9 AHS0208 CATGAGTGAGGCGATATAGTGAGCGGTTTGTAGATT CD116 Hgmcsfr1-M1 AHS0238 CTTAGTTGTAGGATCGAGAGTAGGTGTGCATTGCGT_
Avisos del producto: Este reactivo se suministra liofilizado en un formato pretitulado. El proceso de producción se sometió a rigurosas pruebas y validación para garantizar la generación de un conjugado de alta calidad con un rendimiento consistente y una actividad de unión específica. Sin embargo, no se han realizado pruebas de verificación en todos los lotes de conjugado. Visite https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics para consultar los protocolos técnicos. Visite https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/ para acceder a los archivos de referencia de AbSeq en formato FASTA para análisis bioinformáticos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Siga las directrices estatales y locales al desechar residuos peligrosos. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Para conocer las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents. Lea y comprenda las fichas de datos de seguridad (FDS) antes de manipular productos químicos. Para obtener las FDS, visite regdocs.bd.com o contacte con el soporte técnico de BD Biosciences en scomix@bd.com.
Tablas: Descripción: Cantidad/Tamaño: Cantidad/Tamaño Número de pieza: Número de pieza ID de EntrezGene: ID de EntrezGene
Descripción: Cantidad/Tamaño: 1.0 Número de pieza: N/A ID de EntrezGene: N/A