BD, 572612, Panel de proteínas innatas BD® OMICS-One

Reactividad: Humana (Probada en desarrollo)
Solicitud: Secuenciación de 3' de células individuales (calificada)
Estado regulatorio: RUO
Descripción: El panel de proteínas innatas BD® OMICS-One consta de 4 tubos individuales: 2 tubos de panel de proteínas de células NK (1 prueba/tubo) con 30 especificidades diferentes contra los principales marcadores de células NK y 2 tubos de panel de proteínas de células mieloides/APC (1 prueba/tubo) con 30 especificidades diferentes contra los principales marcadores de células mieloides/APC. Diseñado y optimizado para funcionar en el sistema BD Rhapsody™, el panel de proteínas innatas está probado para funcionar a la perfección con el ensayo de análisis del transcriptoma completo (WTA) de BD Rhapsody™, el ensayo de ARNm dirigido, el kit de multiplexación de células individuales (SMK) de BD®, el ensayo CITE-seq intracelular (IC-AbSeq) de BD® y el ensayo multiómico TCR/BCR Next de BD Rhapsody™ para humanos. Cada anticuerpo individual se conjugó con un oligonucleótido que contiene una secuencia de código de barras de anticuerpo específica, flanqueada por una cola de poliA en el extremo 3' y un punto de PCR común (sitio de unión del cebador de PCR) en el extremo 5'. Todas las secuencias de código de barras AbSeq se generaron in silico con una similitud mínima de secuencia con los genomas humanos, presentan una estructura secundaria predicha baja y una distancia de Hamming alta dentro del portafolio de anticuerpos-oligos de BD, lo que permite la corrección de errores de secuenciación y un mapeo único. La cola de poliA del oligonucleótido permite que la secuencia de código de barras sea capturada por las perlas de captura celular mejoradas BD Rhapsody™. El punto de PCR 5' permite una generación eficiente de bibliotecas para diversas plataformas de secuenciación. Cada anticuerpo individual se encuentra en una concentración óptima dentro del panel de 58 plexos para lograr una resolución superior tanto del objetivo como de la población. El panel de proteínas innatas está diseñado con tecnología SMART. Esta tecnología ayuda a reducir el coste de la secuenciación y a aumentar la resolución de los datos al atenuar los anticuerpos dirigidos a marcadores primarios de alta expresión y permitir la reasignación de las lecturas de secuenciación a marcadores expresados ​​a niveles más bajos. Con la tecnología SMART, se pueden cuantificar marcadores de baja expresión sin necesidad de secuenciación más profunda ni un alto coste de secuenciación. Hay cuatro especificidades atenuadas en el Panel de Proteínas Innatas: CD2 y CD31, CD45 y HLA-DR.
Preparación y almacenamiento: Conservar a 2-8 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Este reactivo se suministra liofilizado en un formato pretitulado. Cada prueba puede teñir hasta 2 millones de células. 1. Retire un tubo de BD® OMICS-One NK-Cell Protein Panel y un tubo de BD® OMICS-One APC/Myeloid-Cell Protein Panel de las bolsas de aluminio y deje que alcancen la temperatura ambiente durante 5 minutos. 2. Asegúrese de que ambos pellets se encuentren en el fondo de los tubos. De lo contrario, centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo del tubo. 3. Para cada tubo, añada 35 µL de agua libre de nucleasas al fondo del tubo y deje que los anticuerpos se reconstituyan durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Coloque los anticuerpos reconstituidos en hielo hasta que las células estén listas para la tinción. Nota: Reconstituya el anticuerpo inmediatamente antes de la tinción celular. La incubación prolongada del anticuerpo reconstituido puede aumentar el fondo inespecífico. 5. Para la prueba drop-in de BD® AbSeq Ab-Oligo con 42 plex o menos, prepare la MasterMix de etiquetado de BD® AbSeq en un tubo LoBind de 1,5 ml con hielo. Nota: Para pruebas drop-in con más de 42 plex, contacte con el soporte técnico para realizar el cálculo. Si se realiza un etiquetado secuencial con etiquetas de muestra o sin etiquetas de muestra, prepare la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para las muestras directas de la siguiente manera: ____________________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL) 1 muestra + 2 muestras + 30 % de exceso (µL) 30 % de exceso (µL) Por BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 2,6 5,2 Total de BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 × N* 2,6 × N 5,2 × N FBS † (número de catálogo 554656) 105 – (2,0 x N) 137 – (2,6 x N) 273 – (5,2 x N) Total 105 137 273 Si se realiza un etiquetado conjunto con etiquetas de muestra, prepare la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para las muestras directas de la siguiente manera: ____________________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL) 1 muestra + 2 muestras + 30% de exceso (µL) 30% de exceso (µL) Por BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 2,6 5,2 Total de BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 × N* 2,6 × N 5,2 × N FBS † (número de catálogo 554656) 85 – (2,0 × N) 111 – (2,6 × N) 221 – (5,2 × N) Total 85 111 221 * N = número de anticuerpos de inserción directa. N = 0 si no hay anticuerpos de inserción directa. † FBS = tampón de tinción BD Pharmingen™. 6. Pipetee la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para drop-ins. Centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo y vuelva a colocar en hielo. 7. Para el etiquetado secuencial con o sin etiquetas de muestra, combine los dos tubos con 35 μL de solución reconstituida del panel de proteínas de células NK y 35 μL de solución reconstituida del panel de proteínas de células APC/mieloide para cada muestra. A continuación, añada 105 μL de la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para drop-ins al tubo con 70 μL de solución reconstituida del panel de proteínas de células NK y células APC/mieloide para completar un volumen total de 175 μL. Para el coetiquetado con etiquetas de muestra, combine los dos tubos con 35 μL de solución reconstituida del panel de proteínas de células NK y células APC/mieloide para cada muestra. Luego agregue 85 μL de BD® AbSeq labeling MasterMix de gotas y 20 μL de Sample Tag al tubo que contiene un total de 70 μL de solución reconstituida de NK-Cell y APC/Myeloid-Cell Protein Panel para hacer un volumen total de 175 μL 8. Pipetee la mezcla, centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo del tubo y vuelva a colocar en hielo. 9. Centrifugue las células a 400 × g durante 5 minutos. Si se utiliza Fc Block, continúe con el paso 10. Si no se utiliza Fc Block, salte al paso 11. 10. (Opcional) Para muestras que contienen linfocitos mieloides y B, BD Biosciences recomienda bloquear las señales falsas positivas mediadas por el receptor Fc no específico con Human BD Fc Block (número de catálogo 564220) a. Para realizar el bloqueo, pipetee el Fc Block MasterMix en un tubo LoBind nuevo de 1,5 mL en hielo: _________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL)* 1 muestra + 20 % de exceso (µL) FBS† (número de catálogo 554656) 20,0 24,0 Fc Block‡ (número de catálogo 564220) 5,0 6,0 Total 25,0 30,0 * Suficiente para hasta 1 millón de células. Para bloquear más células, ajuste el volumen. † FBS = tampón de tinción BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. b. Pipetee y mezcle el Fc Block MasterMix y centrifugue brevemente. Coloque en hielo. c. Retire el sobrenadante de las células sin alterar el sedimento. d. Resuspenda las células en 25 μL de Fc Block MasterMix. e. Incube las células a temperatura ambiente (15 °C a 25 °C) durante 10 minutos. f. Añada 175 μL de BD® AbSeq labeling MasterMix del paso 8 a la suspensión celular. Pipetee y mezcle y proceda al paso 12. 11. Retire el sobrenadante de las células sin alterar el pellet. Añada 25 μL de tampón de tinción (FBS) a los 175 μL de BD® AbSeq labeling MasterMix del paso 8 para completar un volumen total de 200 μL. Resuspenda el pellet celular en un volumen total de 200 μL. Pipetee y mezcle. 12. Transfiera las células con BD® AbSeq labeling MasterMix a un nuevo tubo Falcon de poliestireno de 5 mL. 13. Teñir las células en hielo durante 30 minutos. 14. Añada 3-4 mL de tampón de tinción (FBS) a las células marcadas y mezcle con la pipeta. 15. Centrifugue a 400 × g durante 5 minutos. 16. Destape el tubo e inviértalo para decantar el sobrenadante en residuos biopeligrosos. Mantenga el tubo invertido y seque suavemente con una toallita sin pelusa para eliminar el sobrenadante residual del borde del tubo. 17. Repita los pasos 14-16 dos veces más para un total de tres lavados. 18. Resuspenda el sedimento celular lavado final en 620 µL de tampón de muestra frío del reactivo de cartucho mejorado BD Rhapsody™ V3 (número de catálogo 667052) y proceda a la captura de células individuales con el lavado en el cartucho descrito en los subpasos a-c. Consulte el Protocolo de Captura de Células Individuales y Síntesis de ADNc del Sistema de Análisis de Células Individuales BD Rhapsody™ HT (Doc ID 23-24252) o el Protocolo de Captura de Células Individuales y Síntesis de ADNc del Sistema BD Rhapsody™ HT Xpress (Doc ID 23-24253) para obtener más información. Nota: Realice el lavado en el cartucho después de la sedimentación celular (incubación de 8 minutos) como se describe en los siguientes subpasos. a. En la sección del protocolo "Carga de células en el Cartucho de 8 Carriles BD Rhapsody™", después de la carga celular, incube el cartucho en oscuridad a temperatura ambiente durante 8 minutos. b. Coloque el cartucho en el BD Rhapsody™ HT Xpress y realice los pasos de lavado en el cartucho de la siguiente manera: _____________________________________________________________ Material para cargar Volumen (µL) 1 carril Modo de pipeta Aire 380 Cebado/lavado Tampón de muestra fría 380 Cebado/lavado Aire 380 Cebado/lavado Tampón de muestra fría 380 Cebado/lavado c. (Opcional) Realice el paso del escáner: Escaneo de carga celular, si utiliza el protocolo de captura de células individuales y síntesis de ADNc del sistema de análisis de células individuales BD Rhapsody™ HT (ID de documento 23-24252). No es necesario un retraso de 8 minutos antes del escaneo. Advertencia: Todas las muestras y materiales biológicos se consideran biopeligrosos. Manéjelos como si fueran capaces de transmitir infecciones y deséchelos utilizando las precauciones adecuadas de acuerdo con las regulaciones federales, estatales y locales. Nunca pipetee con la boca. Use ropa, gafas y guantes de protección adecuados. Lista de las 30 especificidades AbSeq humanas incluidas en el panel de células NK BD ® OMICS-One: ______________________________________________________________________________ Especificidad Clon Oligo ID BD® AbSeq Código de barras Secuencia___________ CD11b* M1/70 AHS0005 ATCGTTATTCGTTGTAGTTCGCCCGGTTTGAGTAGT CD56 NCAM16.2 AHS0019 AGAGGTTGAGTCGTAATAATAATCGGAAGGCGTTGG CD38 HIT2 AHS0022 GTCAACGATGGGTAGCGGTAGAAATAACGGAACTGG CD27 M-271 AHS0025 TGTCCGGTTTAGCGAATTGGGTTGAGTCACGTAGGT CD2 RPA-2.10 AHS0029 AAACGTAGATTAGAGCCGGGTATGTCGCAACTGATT CD16* 3G8 AHS0053 TAAATCTAATCGCGGTAACATAACGGTGGGTAAGGT CD184 (CXCR4) 12G5 AHS0060 CAGTGTTTAGAGCGGGTTGCATATGTCGTTTAGAGG CD49d 9F10 AHS0063 TAGGGTGACTTAGCGATTGATGCGTATGTTTGGGCG CD314 (NKG2D) 1D11 AHS0065 TTGAAATGCGATGAGACGTAGAGCGATGTAGGTAGC CD335 (NKP46) 9E2/NKP46 AHS0068 CAATTTGTTCGCGTTTAGTAGTCGTCGTCTTATGGG CD54 HA58 AHS0076 AAGAGAATATATGCGTGCGTTGTTAAGGGAATGCGT CD226 DX11 AHS0079 GAGTTTATGATTCGTTTCTTCGGTAGTTCGTCGCTT CD94 HP-3D9 AHS0085 GAGGTTAGGATAGGTGTACGGGTCGAGTTGAATTCT CD336 (NKP44) p44-8 AHS0090 AATGCAAACGATATCACGAAGGGTAGTACACGACGG CD49a SR84 AHS0101 ATGACACGAATGCGACGAGAGGCGAAATAGGTTGGT CX3CR1 2A9-1 AHS0125 GGGTTCACGAGGTTTAAAGCGGTAGTATAGGATGCC CD122 Mik-β3 AHS0146 TTAAAGAGATTCGTGGGTATTGGCGCAGTCATTCCT CD140b (PDGFR) 28D4 AHS0151 GACAACATTTAGGACGTGACGAGAGAGTATAGCTTC CD248 B1/35 AHS0156 ATCACTTATTTCGTTTGGAGGGTTCGTAGGCGTTGC CD63 H5C6 AHS0157 TGCAGCGTTAGGACCAAGCGTTTACCGTAGAATATT CD140a α-R1 AHS0160 TTACTGACTTTCGGACGTTGGTTACTTAGGGTTATG CD31 (PECAM1) WM59 AHS0170 CTAAGGGACGTAATTGAGTTTCGGTGATCGCAGTTT CD96 6F9 AHS0194 CTAATGTAAGAGCGGACGTTTGGGCACTATATGTTT CD161 (KLRB1) HP-3G10 AHS0205 TTTAGGACGATTAGTTGTGCGGCATAGGAGGTGTTC CD158b (KIR) DX27 AHS0209 CGTAGGAGGATTTCGTCGATGGGTTTGTTAGCGTTC CD158e1 DX9 AHS0211 AGGTTCATTGCGGCATTAGGCGTCATATAGTAGGTG CD337/NKp30 P30-15 AHS0213 GGTAACTGACATGACGGAGCGATAATTTCTGGCGGT CD3 UCHT1 AHS0231 AGCTAGGTGTTATCGGCAAGTTGTACGGTGAAGTCG CD329 (Siglec-9) E10-286 AHS0239 CGGGCGCGAAGATAGGATAATAGGTAACGTCAAATG CD106 51-10C9 AHS0251 TCTGATTTAGCGGGTGGACGTATTATAGTGATTGGC_ Lista de las 30 especificidades AbSeq humanas incluidas en el panel APC/Myeloid-Cell de BD® OMICS-One: ______________________________________________________________________________ Especificidad Clon Oligo ID Código de barras BD® AbSeq Secuencia___________ CD103 BER-ACT8 AHS0001 AAATAGTATCGAGCGTAGTTAAGTTGCGTAGCCGTT CD274 (PD-L1) MIH1 AHS0004 ATCGTAAGGCTCGTGGTTCGTAAGTAAGTTCGTATC CD11b* M1/70 AHS0005 ATCGTTATTCGTTGTAGTTCGCCCGGTTTGAGTAGT CD123 7G3 AHS0020 ACAGTTTAGTAGGACGTGAGGTATCGCGAGAATGCC HLA-DR G46-6 AHS0035 TGTTGGTTATTCGTTAGTGCATCCGTTTGGGCGTGG CD14 MPHIP9 AHS0037 TGGCCCGTGGTAGCGCAATGTGAGATCGTAATAAGT CD45 HI30 AHS0040 GTGCGAAATGGCGGAATGTTATCTGCGAATGTAGTC CD33 WM53 AHS0044 GTGTTAGTGATTTGATAGGACGCGTTACGAGAGATT CD80 L307.4 AHS0046 GAGGGTAACGGGTGTCCAAATATCGGCTGTGTAAGT CD16* 3G8 AHS0053 TAAATCTAATCGCGGTAACATAACGGTGGGTAAGGT CD64 10.1 AHS0055 TTGTGCGGCGTAGTATGGTTATCTCGAGTGAAAGTC CD11c B-LY6 AHS0056 ATGCGTTGCGAGAGATATGCGTAGGTTGCTGATTGG CD163 GHI/61 AHS0062 TATTATGTGCGAACTATGGTATCCGTATTGAGGGCT CD195 (CCR5) 2D7/CCR5 AHS0070 ATGGTTTAGTCGTACGTGGGTTTAGATTGGCGGTGC CD206 19.2 AHS0072 GCTGGTTATCGTTTGAGAGTCGGTATGGAATGCGGT CD32 FLI8.26 AHS0073 GGTTGTAGGTGCGGAATATAAGCGTCGTTGAGGTGT CD273 MIH18 AHS0075 TGAGTAACCGTATGTAATCCGTAATCGTAGAAGCGC CD141 1A4 AHS0083 TGGAAGTAAGTATGGGTCGGCGTAAATTGTGCGTGT CD1c F10/21A3 AHS0088 ATAGATTACATTCGTTTAGCGTTGGGTTCGGTCCGT CD40 5C3 AHS0117 GGTGTAATTGGGCTAGAACGTATATGCGGTAAGGCG FCeR1a AER-37 AHS0129 GATATGGCGTGATGGTAGGTTCGGTTTAAGTTAGCG CD169 7-239 AHS0133 CATTAAGCACGAAGGGTATAGGTAGGAACGGTTGGC CD36 IVC7 AHS0135 AATTGTAGTAGTCCGGTGTATGTAGAGTAGGCGTTT CD115 (CSF1R) 9-4D2-1E4 AHS0136 CTGGTGGCGGCGAATTTGGTTACGACATATAGGGTT CD162 KPL-1 AHS0139 CCAGATAGGCGATAGTGTTTAGGAGCGATTAGTGTG CD85K ZM3.8 AHS0179 AGTAGTCGTAGTTGGCGTGAATTGGGCTTATATCTG VISTA MIH65.RMAB AHS0187 ATCAGGGAATCTCGGTAAGTTAAACGTGTATAGTGC CD15 W6D3 AHS0196 ATAGCATGGACGACGTAGATAATAAGTGGCGGGTT CD192 (CCR2) LS132.1D9 AHS0208 CATGAGTGAGGCGATATAGTGAGCGGTTTGTAGATT CD116 Hgmcsfr1-M1 AHS0238 Los paneles de proteínas de células NK y células APC/mieloides CTTAGTTGTAGGATCGAGAGTAGGTGTGCATTGCGT_ * contienen el mismo anticuerpo CD11b y CD16.
Avisos del producto: Este reactivo se suministra liofilizado en un formato pretitulado. El proceso de producción se sometió a rigurosas pruebas y validación para garantizar la generación de un conjugado de alta calidad con un rendimiento consistente y una actividad de unión específica. Sin embargo, no se han realizado pruebas de verificación en todos los lotes de conjugado. Visite https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics para consultar los protocolos técnicos. Visite https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/ para acceder a los archivos de referencia de AbSeq en formato FASTA para análisis bioinformáticos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Para conocer las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents. Lea y comprenda las hojas de datos de seguridad (SDS) antes de manipular productos químicos. Para obtener las SDS, visite regdocs.bd.com o comuníquese con el soporte técnico de BD Biosciences en scomix@bd.com.
Tablas: Descripción: Cantidad/Tamaño: Cantidad/Tamaño Número de pieza: Número de pieza ID de EntrezGene: ID de EntrezGene
Descripción: Cantidad/Tamaño: 1.0 Número de pieza: N/A ID de EntrezGene: N/A