BD, 554653, Células de control positivo de citocina de ratón MiCK-2 de BD Pharmingen™

Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Concentración: 5x10^6 células/ml
ID de registro: AB_2869003
Tampón de almacenamiento: congelado en FBS y DMSO al 10%.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Almacene el producto a -80 °C antes de usarlo o para el almacenamiento a largo plazo de soluciones madre. Descongele y centrifugue rápidamente el producto antes de usarlo. Evite congelar y descongelar repetidamente el producto. Esta preparación no contiene conservantes, por lo que debe manipularse en condiciones asépticas. Al recibirla, almacene la suspensión celular a -80 °C. Alternativamente, puede descongelar la suspensión celular congelada y centrifugar rápidamente el vial tapado para asegurar la recuperación completa de su contenido. Después de resuspender completamente las células con una pipeta, las alícuotas de un solo uso pueden volver a congelarse y almacenarse (-80 °C) en microtubos de polipropileno para su uso posterior.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Las suspensiones celulares de control positivo MiCK-2 están diseñadas para proporcionar células que contienen acumulaciones intracelulares de IL-4, IL-10 o GM-CSF, fácilmente detectables mediante tinción inmunofluorescente de citocinas intracelulares y citometría de flujo. Como tal, estas células sirven como controles positivos para verificar la actividad de los anticuerpos fluorescentes anticitocinas y el propio procedimiento de tinción (p. ej., permeabilización). Para la tinción, la preparación celular congelada debe descongelarse primero rápida y cuidadosamente. Luego, se pueden transferir alícuotas de la suspensión celular a micropocillos o tubos. Las células fijadas y no permeabilizadas deben lavarse dos veces con tampón de tinción para eliminar el DMSO. Se recomienda teñir primero las células lavadas con un conjugado fluorescente de RM4-5 (p. ej., n.º de cat. 553047, 553049, 553050 o 553051), un anticuerpo que se une a las moléculas CD4 expresadas en la superficie de las células T CD4+ de ratón fijadas. A continuación, las células deben incubarse durante 10 minutos en tampón de permeabilización/lavado y lavarse. Las células se tiñen entonces con un conjugado fluorescente de BVD4-1D11 (IL-4 antirratón de rata; n.º de cat. 553051), 11B11 (IL-4 antirratón de rata; n.º de cat. 554435 o 554436), JES5-16E3 (IL-10 antirratón de rata; n.º de cat. 554466, 554467 o 554468) o MP1-22E9 (GM-CSF antirratón de rata; n.º de cat. 554406). Nota: La tinción de anticuerpos específicos de citocinas de las células MiCK-2 puede demostrarse mediante la preincubación del anticuerpo específico de citocinas conjugado con citocina recombinante o mediante el pretratamiento de las células MiCK-2 con un anticuerpo bloqueante no marcado. Debido al procedimiento de activación celular, una pequeña proporción de células pueden teñirse de manera no específica (es decir, no bloquearse ni con el anticuerpo no marcado ni con el ligando).
Avisos del producto: Evite el contacto con la piel y los ojos. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources.