BD, 556030, conjunto de PCNA antihumano de ratón FITC de BD Pharmingen™

Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_396306
Descripción: El antígeno nuclear de células proliferantes (PCNA) se identificó inicialmente como un antígeno nuclear en células proliferantes y posteriormente se describió como una subunidad de la ADN polimerasa δ. Los niveles de proteína PCNA alcanzan su punto máximo durante la fase S del ciclo celular, momento en el que forma un complejo con el inhibidor de p21. El PCNA es casi indetectable en otras fases del ciclo. Debido a su expresión única, el PCNA se ha utilizado ampliamente en estudios que asocian el pronóstico de la progresión tumoral y la proliferación neoplásica. Se ha informado que el PCNA humano consta de 262 aminoácidos con un peso molecular aparente de 36 kDa.
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados 1. Coseche, cuente y sedimente las células siguiendo los procedimientos estándar. Nota: PCNA se expresa mediante células proliferantes. El uso de células en reposo (p. ej., PBMC no estimuladas) puede dar resultados negativos. 2. Mientras agita, agregue 5 ml de etanol frío al 70% - 80% gota a gota al sedimento celular (1-5 x 10^7 células). Incube a -20 °C durante al menos 2 horas. Estas células fijadas se pueden almacenar a -20 °C hasta 60 días antes de la tinción. 3. Lave dos veces con 30-40 ml de tampón de tinción (PBS con 1% FBS, 0,09% NaN 3 ), centrifugue durante 10 minutos a 200 g. 4. Resuspenda las células a una concentración de 1 X 10^7/ml. 5. Transfiera 100 µl (1 X 10^6 células) de suspensión celular a cada tubo de muestra. 6. Añada 20 µl de anticuerpo anti-PCNA diluido adecuadamente según el protocolo en los tubos anteriores. Mezcle suavemente. 7. Incube los tubos a temperatura ambiente (TA) durante 20-30 minutos en la oscuridad. 8. Lave con 2 ml de tampón de tinción a 200 g durante 5 minutos. 9. Aspire el sobrenadante. 10. Si utiliza anti-PCNA directamente conjugado, proceda al paso 13. 11. Si utiliza anti-PCNA purificado, añada 50 µl de anticuerpo secundario diluido (p. ej., n.º de cat. 555988); si utiliza anti-PCNA conjugado con biotina, añada 50 µl de SAV-PE (n.º de cat. 554061) a cada tubo de muestra e incube a TA durante 30 minutos en la oscuridad. 12. Repita los pasos 8 y 9. 13. Añada 0,5 ml de tampón de tinción a cada tubo. Si se utiliza anti-PCNA o anticuerpo secundario conjugado con FITC, añadir 10 µl de solución de tinción con yoduro de propidio (n.º de cat. 556463) a cada tubo; para anti-PCNA o anticuerpo secundario conjugado con PE, añadir 20 µl de solución de viabilidad celular BD Via-Probe™ (n.º de cat. 555816) a cada tubo. 14. Proceder al análisis citométrico de flujo.
Avisos del producto: Este anticuerpo ha sido optimizado y preensayado con su control de isotipo correspondiente para su uso en el volumen recomendado de 20 ul/prueba. NO se recomienda la titulación de los reactivos ni su sustitución por otro control de isotipo (no correspondiente). Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
N/D : 100.0 : N/D : N/D