BD, 556347, BD Pharmingen™ Anti-VHL de ratón purificado

Nombre alternativo: proteína de von Hippel-Lindau; RCA1; HRCA1
Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (reportada)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: proteína recombinante humana VHL aa. 1-213
Aplicación: Inmunohistoquímica-formalina (requiere recuperación de antígeno) (probado rutinariamente), inmunoprecipitación (informada), Western blot (no recomendado)
Peso molecular objetivo: 21-30 kDa
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_396376
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Western Blot: No se recomienda el clon Ig32 para la aplicación de Western blot. Se ha demostrado que reconoce una banda no específica por encima de la proteína VHL. Sin embargo, los estudios de ARNi han demostrado que el clon Ig32 reconoce una banda más tenue por debajo de esta banda dominante. Además, los laboratorios han informado el uso de la línea celular de adenocarcinoma de células renales 786-O (ATCC CRL-1932, VHL null), ARNi o sobreexpresión de VHL para demostrar que el clon Ig32 reconoce específicamente la proteína VHL. Por lo tanto, recomendamos el uso del clon Ig32 en sistemas de sobreexpresión o en condiciones nativas (no desnaturalizantes), como la tinción IHC o las aplicaciones de inmunoprecipitación (IP). Inmunohistoquímica: El anticuerpo Ig32 es útil para la tinción inmunohistoquímica. Tras el pretratamiento con Retrievagen A, se debe utilizar el anticuerpo Ig32 purificado en una concentración de 2,5 µg/ml a 5 µg/ml, titulando la concentración para obtener una tinción inmunohistoquímica indirecta óptima. Los tejidos pueden visualizarse mediante un procedimiento de tinción de tres pasos en combinación con el anticuerpo secundario Biotin Goat anti-Mouse Ig (n.° de cat. 550337) y Estreptravidina-HRP (n.° de cat. 550946) junto con el kit de sustrato DAB (n.° de cat. 550880). Para la tinción, se puede utilizar el kit de detección de Anti-Mouse Ig HRP (n.° de cat. 551011), que contiene el anticuerpo secundario biotinilado, el diluyente de anticuerpos, estreptavidina-HRP y el sustrato DAB. Para la tinción IHC en cortes de parafina, consulte http://www.bdbiosciences.com/documents/Immuno_Prep_Stain_Paraffin.pdf. Puede encontrar información adicional sobre el protocolo en http://www.bdbiosciences.com/support/resources/cell_biology/index.jsp. IP: Se ha descrito la utilidad del anticuerpo Ig32 purificado para inmunoprecipitar VHL humano nativo. Tenga en cuenta que esta aplicación no se prueba de forma rutinaria en BD Biosciences Pharmingen. Se recomienda a los investigadores determinar las concentraciones óptimas para cada aplicación.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.