BD, 610028, BD Transduction Laboratories™ Antifosfolipasa Cγ1 de ratón purificada

Reactividad: Humano (prueba de control de calidad), ratón, rata, perro, pollo (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 de ratón
Inmunógeno: Péptido de la región N-terminal de la PLCγ1 de vaca
Aplicación: Western blot (probado rutinariamente), bioimagen, inmunohistoquímica, inmunoprecipitación (probado durante el desarrollo)
Peso molecular objetivo: 148 kDa
Concentración: 250 µg/ml
ID de registro: AB_397446
Tampón de almacenamiento: solución tamponada acuosa que contiene BSA, glicerol y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a -20 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Western blot: Consulte http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml Protocolo recomendado para bioimágenes: 1. Siembre las células en un medio de cultivo apropiado a una densidad celular apropiada en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche a 48 horas. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y lave (una o dos veces) con 100 µl de PBS 1×. 3. Fije las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incubándolo durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 4. Retire el fijador de los pocillos y lávelos (una o dos veces) con 100 µl de PBS 1×. 5. Permeabilice las células usando metanol frío (a), Triton™ X-100 (b) o saponina (c): a. Añada 100 µl de metanol al 90 % a -20 °C o tampón de permeación BD™ Phosflow III a -20 °C (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. b. Añada 100 µl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. c. Añada 100 µl de tampón de permeación/lavado 1× (n.º de cat. 554723) a cada pocillo e incube durante 15 a 30 minutos a temperatura ambiente. Continúe usando el tampón de permeabilización/lavado 1× para todos los pasos de lavado y dilución posteriores. 6. Retire el tampón de permeabilización de los pocillos y lave una o dos veces con 100 µl del tampón adecuado (ya sea 1× PBS o 1× tampón de permeabilización/lavado, consulte el paso 5.c.). 7. Paso de bloqueo opcional: Retire los tampones de lavado y bloquee las células añadiendo 100 µl de tampón de bloqueo BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (n.º de cat. 554656) o FBS al 3 % en el tampón de dilución adecuado a cada pocillo e incubando durante 15 a 30 minutos a temperatura ambiente. 8. Diluya el anticuerpo a su concentración de trabajo óptima en el tampón de dilución adecuado. Titule los anticuerpos purificados (no conjugados) y los reactivos del segundo paso para determinar la concentración óptima. Si utiliza un conjugado de anticuerpos certificado por Bioimaging, dilúyalo 1:10. 9. Añada 50 µl de anticuerpo diluido por pocillo e incube durante 120 minutos a temperatura ambiente. Si utiliza anticuerpos marcados con fluorescencia, incube en oscuridad. 10. Retire el anticuerpo y lave los pocillos tres veces con 100 µl de tampón de lavado. Opcionalmente, puede añadir un lavado con detergente (100 µl de Tween al 0,05 % en PBS 1×) antes de los pasos de lavado habituales. 11. Si el anticuerpo utilizado está marcado con fluorescencia, continúe con el paso 12. De lo contrario, si utiliza un anticuerpo purificado sin marcar, repita los pasos 8 a 10 con un reactivo de segundo paso marcado con fluorescencia para detectar el anticuerpo purificado. 12. Tras el lavado final, realice una contratinción de los núcleos añadiendo 100 µl de una solución de 2 µg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich, n.º de cat. B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la adquisición de imágenes. 13. Observe y analice las células en un instrumento de adquisición de imágenes adecuado. Los filtros recomendados para los instrumentos BD Pathway™ son: Instrumento Excitación Emisión Dicroico BD Pathway 855 488/10 515 LP Fura/FITC BD Pathway 435 482/35 536/40 FF506
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para la aplicación de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para un rendimiento óptimo. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.