Cytiva, 1003000, kits de LNP de HSC CD34+

Kit de LNP CD34+ HSC, 100 µL El kit CD34+ HSC LNP es una mezcla de reactivos LNP optimizada para la administración de ARNm o ARNm/sgRNA de Cas9 en HSC CD34+. Este reactivo permite a los investigadores establecer un método clínicamente relevante y escalable a escala de descubrimiento y preclínica para la administración y edición génica ex vivo. El kit CD34+ HSC LNP ofrece las siguientes ventajas: • Formulación LNP optimizada: administre ARN con alta eficiencia de transfección mediante el uso de una formulación LNP patentada optimizada* • Alta eficiencia de knockout: logra una eliminación de genes y expresión de proteínas de alta eficiencia dependiente de la dosis. • Alto rendimiento celular y potencial de diferenciación: mantener una alta viabilidad celular, rendimiento y potencial de diferenciación después de la edición. • Escale desde el descubrimiento hasta la etapa preclínica: amplíe su investigación de terapia celular ex vivo desde el descubrimiento hasta la etapa preclínica utilizando la plataforma NanoAssemblr™. • Flujo de trabajo validado: optimizado y validado con el flujo de trabajo de fabricación de células HSC CD34+. *La composición de LNP en este kit destinado únicamente a uso en investigación incluye excipientes lipídicos ionizables que pueden licenciarse para futuras evaluaciones clínicas. Fácilmente integrado en protocolos estándar de cultivo de células CD34+ HSC Los kits CD34+ HSC LNP se pueden integrar fácilmente en un flujo de trabajo CD34+ HSC tanto para la expresión génica basada en ARNm como para aplicaciones de edición génica CRISPR/Cas. A continuación se describe un flujo de trabajo general. Diagrama esquemático del tratamiento con LNP y del flujo de trabajo de cultivo de células HSC. La producción de LNP se puede desacoplar del flujo de trabajo de cultivo celular, lo que permite una mayor flexibilidad y simplicidad del flujo de trabajo. Eliminación génica dependiente de la dosis de CD45 Logre una edición genómica altamente eficiente y dependiente de la dosis de HSC CD34+ procedentes de sangre de cordón umbilical humana y sangre periférica movilizada humana utilizando el kit CD34+ HSC LNP, 100 µL en el sistema NanoAssemblr™ Spark™, ​​y el kit CD34+ HSC LNP, 2 mL en el instrumento NanoAssemblr™ Ignite™. A) Respuesta a la dosis de CD45 de LNP de ARNm y sgRNA CRISPR-Cas9 producidas en el instrumento NanoAssmblr™ Spark™. B) Viabilidad celular correspondiente. C) Imágenes representativas de placas de UFC sin tratar y tratadas con LNP de ARN CRISPR. D) Rendimientos de colonias eritroides y mieloides normalizados de muestras sin tratar (UT), tratadas con LNP vacías y tratadas con LNP de ARN CRISPR. Proliferación y viabilidad celular después del tratamiento con LNP. Las HSC tratadas con LNP muestran una alta proliferación y viabilidad celular. A) Proliferación celular y B) viabilidad monitoreadas durante más de 1 semana después de la edición génica de HSC tratada con LNP de ARN CRISPR dirigida a CD45 mediada por LNP. C) Edición génica mediada por LNP comparada entre n = 2 donantes mediante citometría de flujo a través del análisis de expresión de superficie de CD45 y D) histograma correspondiente. Criopreservación y congelación-descongelación de HSC después del tratamiento con LNP La criopreservación de HSC tratadas con LNP mostró una alta viabilidad celular y rendimiento. Además, las células mantuvieron su distribución fenotípica de HSC injertables mientras mantuvieron la eficiencia de inactivación de CD45. Criopreservación de HSC después de la edición del gen CRISPR Cas9 mediada por LNP. A) Diagrama esquemático de los ciclos de congelación-descongelación (F/T) de HSC. B) Niveles de fenotipo de HSC de repoblación a largo plazo post-descongelación o sin congelar, en los puntos de tiempo de congelación de 24 h o 48 h después del tratamiento con LNP. C) Viabilidad celular y recuperación de células vivas después del ciclo F/T de tratamiento con LNP de 24 h. D) Eficiencia de inactivación de CD45 observada en HSC tratadas con LNP congeladas-descongeladas y frescas en células vivas totales y fenotipo injertable (CD34+ CD38- CD90+ CD133+). Escalado del cultivo celular y producción de ARN-LNP Los kits CD34+ HSC LNP están disponibles en los instrumentos NanoAssemblr™ Spark™ y NanoAssemblr™ Ignite™. Los reactivos también están disponibles para escalar el desarrollo del proceso y la fabricación GMP a través de BioPharma Services. Los kits CD34+ HSC LNP combinados con la plataforma NanoAssemblr™ permiten un rendimiento robusto y equivalente en los instrumentos Spark™ e Ignite™ y ofrecen una escalabilidad perfecta desde el descubrimiento hasta los estudios preclínicos. A) Eliminación de CD45 y B) Eliminación de CD33 de la población total de células vivas, así como C) viabilidad celular correspondiente. AC incluye >20 experimentos únicos con >4 donantes únicos. D) Las HSC tratadas con LNP sin tratar, vacías y cargadas con ARN CRISPR-Cas9 se evaluaron para la proliferación utilizando un contador celular automatizado. E) Se evaluó la clonogenicidad de células madre hematopoyéticas (HSC) tratadas con LNP vacío y LNP cargado con ARN CRISPR-Cas9 sin tratar mediante un contador automatizado de UFC, 5 experimentos independientes con Spark™ y 2 experimentos independientes con el instrumento Ignite™. Componentes del kit.

	Kit de LNP CD34+ HSC, 100 µL, (N.º de pieza 1003000)	Kit CD34+ HSC LNP, 100 µL con cartuchos, (N.º de pieza 1004000)	Kit CD34+ HSC LNP, 2 ml, (N.º de pieza 105000)
Mezcla de lípidos	100 µL	100 µL	2 ml
Tampón de formulación tipo 1	400 µL	400 µL	1,6 ml
Tampón de dilución tipo 1	1,5 ml	1,5 ml	100 ml (10X)
Tampón de criopreservación tipo 2	-	-	6 ml
Apolipoproteína-E3 (ApoE3)	100 µg	100 µg	500 hacen
Cartuchos Spark™	-	5	-