Cytiva, 25640080, Kit de construcción grande TempliPhi™

Kit de construcción grande TempliPhi El kit de construcción grande TempliPhi utiliza amplificación por círculo rodante isotérmico (RCA) para preparar de manera eficiente plantillas de secuenciación de ADN específicamente a partir de vectores de ADN grandes (por ejemplo, fósmidos y BAC). • Desarrollado para usuarios de alto rendimiento y diseñado específicamente para la preparación de ADN BAC o fósmido. • Partir de cantidades de microlitros de plantillas purificadas, así como de cultivos bacterianos o reservas de glicerol. • Generar cantidades de 5 μg de ADN total. • Proceso simplificado, 20 minutos de tiempo práctico. • La amplificación se completa en 18 h sin necesidad de ciclado térmico. • Protocolo simple, fácil de automatizar y con gran reproducibilidad. Tendencias en la amplificación por círculo rodante: Las capacidades de manipulación, producción sin errores y ensamblaje de ácidos nucleicos están avanzando. Descubra cómo los kits de amplificación TempliPhi utilizan la amplificación isotérmica por círculo rodante (RCA), habilitada por la ADN polimerasa phi29, para impulsar estos avances . Descripción El kit de amplificación de ADN de constructos grandes TempliPhi (TempliPhi LC Kit) se desarrolló específicamente para preparar plantillas para la secuenciación de ADN de BAC o fósmidos. El método TempliPhi utiliza la enzima ADN polimerasa del bacteriófago Phi29 para amplificar exponencialmente plantillas de ADN circular monocatenario o bicatenario mediante amplificación por círculo rodante (RCA). Este método de amplificación isotérmica produce cantidades de microgramos de ADN a partir de cantidades de picogramos de material de partida en pocas horas. La amplificación in vitro de cantidades muy pequeñas de ADN plantilla elimina la necesidad de cultivos celulares durante la noche y la purificación convencional de plásmidos o ADN M13. La actividad de corrección de la ADN polimerasa Phi29 garantiza una replicación de ADN de alta fidelidad. El material de partida para la amplificación puede ser una pequeña cantidad de células bacterianas que contengan ADN de BAC o fósmidos, o cualquier muestra de ADN circular. Las colonias bacterianas pueden seleccionarse de placas de agar y añadirse directamente a la reacción TempliPhi LC. Como alternativa, se pueden utilizar microlitros de un cultivo bacteriano saturado o una solución madre de glicerol como material de partida. Independientemente de la fuente del material de partida, la amplificación se completa en 18 h a 30 °C, sin necesidad de ciclos térmicos. El producto de la reacción TempliPhi Large Construct consiste en concatémeros bicatenarios de alto peso molecular del molde circular. El producto TempliPhi Large Construct es ADN bicatenario que puede secuenciarse con cebadores directos e inversos. El ADN amplificado mediante el método de amplificación TempliPhi Large Construct puede utilizarse directamente en reacciones de secuenciación cíclica sin purificación.