Cytiva, RPN1633, sistema de etiquetado de ADN Amersham Rediprime II

Sistema de etiquetado de ADN Rediprime II
El sistema de etiquetado de ADN Rediprime II proporciona mezclas de reacción dispensadas individualmente que se secan en presencia de un estabilizador y un colorante para facilitar el etiquetado de las sondas. Las mezclas de reacción Rediprime se han formulado utilizando un Klenow mejorado sin exonucleasas para obtener sondas con una actividad específica de 1,9 × 109 dpm/μg o superior tras 10 minutos de incubación a 37 °C con la mayoría de los sustratos de ADN. Al sustituir un nucleótido no radiactivo por su equivalente radiomarcado en la mezcla de reacción, el ADN recién sintetizado se vuelve radiactivo. Se pueden etiquetar cantidades muy pequeñas de ADN de entrada, lo que permite producir sondas con una actividad específica muy alta con cantidades relativamente pequeñas de nucleótidos añadidos. Estos fragmentos marcados radiactivamente pueden utilizarse como sondas de hibridación sensibles para una amplia gama de aplicaciones basadas en filtros.
• Larga vida útil y protocolo simple y rápido.
• Reacciones premezcladas, estables a temperatura ambiente, con verificación de color para el etiquetado de ADN para actividades específicas de > 10⁹ dpm/µg.
• No es necesario eliminar los nucleótidos no incorporados antes de la hibridación.
• El ADN se puede marcar en solución o en presencia de agarosa de bajo punto de fusión.
• La reacción de etiquetado se completa en 10 minutos.
Rediprime II consta de reacciones de cebado aleatorio premezcladas, dispensadas individualmente y liofilizadas para estabilidad ambiental. Simplemente añada el sustrato y [α-₃₂P]dCTP. Se pueden usar tan solo 25 ng de ADN sustrato. Apto solo para dCTP. Cada sistema incluye los siguientes reactivos, suficientes para 30 o 60 reacciones (según el producto solicitado): tubos premezclados y predispensados ​​con 30x de mezcla de marcaje y ADN de control.
Feinberg y Vogelstein introdujeron el uso de hexanucleótidos de secuencia aleatoria para iniciar la síntesis de ADN a partir de ADN molde desnaturalizado en numerosos puntos a lo largo de su longitud. El complejo cebador-molde es un sustrato para el fragmento Klenow de la ADN polimerasa I. Al sustituir un nucleótido no radiactivo por su equivalente radiomarcado en la mezcla de reacción, el ADN recién sintetizado se vuelve radiactivo. Se pueden marcar cantidades muy pequeñas de ADN de entrada, lo que permite producir sondas de actividad muy específica con cantidades relativamente pequeñas de nucleótidos añadidos. Estos fragmentos marcados radiactivamente pueden utilizarse como sondas de hibridación sensibles para una amplia gama de aplicaciones basadas en filtros.