Thermo Fisher, 12744017, Kit de clonación pOptiVEC™-TOPO™ TA™

El kit pOptiVEC™-TOPO™ TA Cloning™ está diseñado para el crecimiento y la transfección eficientes de células DG44 de ovario de hámster chino (CHO) deficientes en dihidrofolato reductasa (DHFR) en cultivo en suspensión. El kit proporciona un protocolo de flujo de trabajo completo, así como los componentes necesarios para la transfección eficiente de células DHFR-DG44 en un entorno sin suero y el posterior desarrollo estable de una línea celular, incluyendo:
• Vector pOptiVEC™-TOPO™: un vector de clonación bicistrónico que contiene un gen DHFR para el desarrollo estable de líneas celulares en células CHO-DG44 (Figura 1); el vector está adaptado a TOPO™ y permite la clonación de un producto de PCR que contiene el gen de interés con una eficiencia >85 %
• Reactivo de transfección FreeStyle™ MAX: un reactivo de transfección libre de origen animal que ofrece alta eficiencia de transfección y resultados consistentes
• Medio CD OptiCHO™: un medio libre de proteínas, definido químicamente (sin hipoxantina ni timidina) diseñado específicamente para el cultivo celular en suspensión de alta densidad de células CHO-DG44 recombinantes y rendimiento de proteína secretada.
• Medio CD DG44: un medio libre de proteínas y químicamente definido, suplementado con hipoxantina y timidina para favorecer el crecimiento óptimo de células DG44 en cultivo en suspensión.
• Células DG44: preadaptadas al medio CD DG44 y seleccionadas para un crecimiento celular superior y eficiencias de transfección. Además, el kit OptiCHO™ Express proporciona GIBCO™ OptiPRO™ SFM para una mejor formación del complejo ADN-lípido, L-glutamina (proporcionada por separado para una mayor estabilidad del medio) y Pluronic™ F-68 para controlar las fuerzas de corte en cultivos en suspensión.
Almacenamiento: Conserve Pluronic™ F-68 entre 15 °C y 30 °C. Conserve el medio CD DG44, OptiPRO™ SFM, el medio CD OptiCHO™ y el reactivo de transfección FreeStyle™ MAX entre 2 °C y 8 ​​°C en la oscuridad. Conserve la L-glutamina, el vector pOptiVEC™-TOPO™, el cebador de secuenciación directa CMV y el cebador de secuenciación inversa EMCV IRES entre -5 °C y -20 °C. Conserve las células químicamente competentes de E. coli One Shot™ TOP10 a -80 °C. Conserve las células DG44 en nitrógeno líquido.
Método de clonación: TOPO™-TA
Sistema Constitutivo o Inducible: Constitutivo
Tipo de administración: Transfección
Para usar con (aplicación): Clonación
Funciones clave: Producción de proteínas, desarrollo de líneas celulares estables
Línea de productos: Gibco™
Tipo de producto: Kit de clonación
Promotor: CMV
Etiqueta de proteína: Sin etiquetar
Cantidad: 1 Kit
Agente de selección (eucariota): Medio HT (-), MTX (metotrexato)
Vector: Vectores TOPO-TA
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una