Thermo Fisher, A39265, EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-Destiobiotina, formato No-Weigh™

EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin, formato No-Weigh™ Thermo Scientific EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin es un reactivo de marcado de cadena larga, reactivo con amina, cuyo grupo similar a la biotina es eluible de la estreptavidina, lo que lo hace ideal para el marcado y la purificación de proteínas purificadas o de la superficie celular.
Características de EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Destiobiotina:
•Destiobiotina: el análogo de la biotina permite una fácil elución de la estreptavidina, una característica ideal para aplicaciones de purificación por afinidad.
•Etiquetado de proteínas: etiquete anticuerpos o proteínas en muestras purificadas o mixtas para permitir una alta recuperación en ensayos de pull-down con perlas de estreptavidina
•Etiquetado de la superficie celular: modifica únicamente las proteínas de la superficie de las células enteras porque el reactivo cargado negativamente no permea las membranas celulares.
•Reactivo a aminas: reacciona con aminas primarias (-NH2), como las cadenas laterales de lisina o los extremos amino de los polipéptidos.
Soluble: el grupo sulfo-NHS cargado aumenta la solubilidad del reactivo en agua en comparación con los compuestos de éster de NHS comunes. La sulfo-NHS-LC-destiobiotina es una variante de la biotina que se activa como un éster sulfo-NHS con un brazo espaciador de cadena larga (LC) para marcar covalentemente aminas primarias (-NH₂) de proteínas u otras moléculas con grupos destiobiotina. La etiqueta de destiobiotina se une a la estreptavidina y a otras proteínas de unión a biotina con alta especificidad, pero eluye fácilmente en condiciones suaves (p. ej.,
Por ejemplo, mediante desplazamiento competitivo con biotina libre regular. Por lo tanto, este reactivo es una alternativa útil a Sulfo-NHS-LC-Biotina (N.° de pieza 21335) para técnicas de avidina-biotina en las que se desea una elución no desnaturalizante de las proteínas marcadas. El grupo sulfo-NHS con carga negativa impide que este reactivo penetre en las membranas celulares; por lo tanto, Sulfo-NHS-LC-Destiobiotina puede utilizarse para limitar el marcaje a las proteínas de la superficie celular de células intactas. El formato sin pesaje (5 viales resellables de 1 mg) elimina las dificultades asociadas con el pesaje de pequeñas cantidades de reactivo y maximiza la protección del reactivo no utilizado contra la hidrólisis.
Destiobiotina vs. Biotina. La destiobiotina es un análogo de la biotina de un solo anillo, libre de azufre, que se une a la estreptavidina con una especificidad casi igual, pero con menor afinidad que la biotina (1/Kd = 10¹1 frente a 10¹5 M, respectivamente). En consecuencia, las proteínas cebo destiobiotiniladas y sus compañeros interactuantes pueden eluirse de forma fácil y específica de la resina de afinidad de estreptavidina utilizando condiciones suaves basadas en el desplazamiento competitivo con biotina libre. Para experimentos de ensayos de pull-down con muestras biológicas, esta característica de liberación suave de la destiobiotina también ayuda a minimizar la copurificación de moléculas biotiniladas endógenas, que permanecen unidas a la estreptavidina tras la elución de los complejos proteicos diana con biotina libre. El sistema de afinidad avidina-biotina modificado también elimina la necesidad de utilizar condiciones de elución rigurosas que podrían disociar los complejos o dañar la proteína o célula diana. Las técnicas basadas en destiobiotina son ideales cuando se utilizan proteínas nativas o recombinantes que no se expresan con una etiqueta de fusión y cuando se aíslan proteínas capturadas en condiciones nativas, como cuando se apunta a células intactas o proteínas de la superficie celular.
Marcaje con reactivos de ésteres de NHS. Los ésteres de biotina (NHS) de N-hidroxisulfosuccinimida son el tipo más común de reactivo de biotinilación. Las biotinas activadas por NHS reaccionan eficientemente con grupos amino primarios (-NH₂) en soluciones alcalinas para formar enlaces amida estables. Las proteínas suelen tener varias aminas primarias disponibles como dianas para el marcaje, incluyendo la cadena lateral de residuos de lisina (K) y el extremo aminoterminal de cada polipéptido. La mayoría de los ésteres sulfo-NHS son directamente solubles en agua, pero no permeables a la membrana. Los ésteres de NHS simples son menos solubles en soluciones acuosas, pero sí permeables a la membrana.
Permeabilidad celular: Impermeabilidad celular
Método de etiquetado: etiquetado químico
Línea de productos: EZ-Link™
Tipo de producto: Sulfo-NHS-LC-Destiobiotina
Cantidad: 5 x 1 mg
Fracción reactiva: éster NHS
Condición de envío: Hielo húmedo
Reactividad química: Amina
Etiqueta o colorante: Destiobiotina
Solubilidad: DMF (dimetilformamida), DMSO (dimetilsulfóxido), agua
Espaciador: Corto
Tamaño de la unidad: cada una