Thermo Fisher, 89839, Kit de enriquecimiento de lisosomas para tejidos y células cultivadas

Kit de Enriquecimiento de Lisosomas para Tejidos y Células Cultivadas. El Kit de Enriquecimiento de Lisosomas Thermo Scientific™ para Tejidos y Células Cultivadas permite el aislamiento y enriquecimiento de lisosomas intactos a partir de extractos crudos de células y tejidos. El kit proporciona reactivos suficientes para preparar 25 extractos y utiliza el Medio de Separación Celular OptiPrep para la separación de lisosomas por densidad de las estructuras celulares contaminantes. Los lisosomas aislados pueden utilizarse para diversas aplicaciones posteriores, como la espectrometría de masas 2D/MS para la investigación proteómica, la microscopía electrónica, el perfilado de enfermedades y la expresión génica, la transducción de señales y la interacción o localización.
Características del kit de enriquecimiento de lisosomas para tejidos y células cultivadas:
• Eficiente y fácil de usar: los reactivos del kit y la centrifugación en gradiente separan los orgánulos de las estructuras contaminantes.
•Compatible: prepare muestras para aplicaciones posteriores, incluidos 2D/MS, microscopía electrónica, perfiles de enfermedades, expresión genética, transducción de señales y estudios de interacción o localización.
• Completo: los kits contienen material suficiente para 25 aplicaciones. Este kit permite el enriquecimiento de orgánulos intactos de células y tejidos. Cada kit utiliza centrifugación en gradiente de densidad para separar los orgánulos de las estructuras celulares contaminantes. Los orgánulos aislados pueden utilizarse para diversas aplicaciones posteriores, como 2D/MS, microscopía electrónica, caracterización de enfermedades, expresión génica, transducción de señales y estudios de interacción o localización.
Enriquecimiento de orgánulos a partir de tejido: Ratas Sprague-Dawley hembras de seis a ocho semanas de edad, con un peso promedio de 160 g, se mantuvieron en ayunas durante la noche antes del sacrificio. Se extirparon el hígado y los riñones, se lavaron con PBS helado, se trituraron con tijeras quirúrgicas y se homogeneizaron en el Reactivo A helado con un Desgarrador de Tejidos Polytron™ durante 45 segundos a 8000 rpm. Posteriormente, se añadió el Reactivo B y el homogeneizado se centrifugó para eliminar los restos celulares. El sobrenadante resultante se superpuso a un gradiente discontinuo de medio de separación celular OptiPrep™ y se centrifugó para aislar y enriquecer el orgánulo objetivo. La banda objetivo se eliminó del gradiente y se analizó mediante Western blot.
Enriquecimiento de orgánulos a partir de células: Se examinaron varias líneas celulares para el aislamiento de lisosomas: A431 [Colección Americana de Cultivos Tipo (Centro de Recursos ATCC™), n.° CRL-1555], células HeLa (ATCC, n.° CCL-2) y células HepG2 (ATCC, n.° HB-8065). Las células se cultivaron hasta una confluencia del 80-90 %. Se recogieron y procesaron aproximadamente de 50 a 200 mg de pasta celular húmeda para el enriquecimiento de lisosomas. Se añadió reactivo de lisosomas A enfriado a las células y se realizó la lisis con un sonicador Misonix 3000 con 15 pulsos y 15 W de potencia.
Posteriormente, se añadió el Reactivo de Lisosoma B y el homogeneizado se centrifugó para eliminar los restos celulares. El sobrenadante resultante se superpuso a varios gradientes discontinuos del Medio de Separación Celular OptiPrep y se centrifugó para aislar y enriquecer el orgánulo diana. La banda diana se eliminó del gradiente y, junto con el lisado total, se normalizó por la cantidad de proteína (salvo indicación contraria) y se analizó mediante Western blot.
Cantidad: 230 mL
Tipo de reactivo: Aislamiento de orgánulos, fraccionamiento subcelular
Suficiente para: 25 muestras de 50 a 200 mg de células o tejidos cada una
Forma: Líquido
Tipo de producto: Kit de enriquecimiento de lisosomas
Tamaño de la unidad: cada una