Kit Thermo Fisher, AM1921, PARIS™

Kit PARIS™. El sistema Ambion™ PARIS™ permite el aislamiento de ARN y proteína nativa de la misma muestra experimental. El kit también permite la separación de las fracciones nuclear y citoplasmática antes del aislamiento de ARN o proteína. El kit contiene reactivos suficientes para 50 purificaciones de 1 a 75 mg de tejido o de 100 a 10⁻ células cada una.
• Procedimiento rápido y sencillo
• Aislar ARN nuclear y citoplasmático y proteínas de células cultivadas
• Aislar el ARN total y las proteínas de células o tejidos cultivados.
• Sin extracción de fenol ni precipitación de alcohol.
• Reduce el tiempo, el coste y la variabilidad entre muestras experimentales independientes. El aislamiento de ARN de alta calidad es el primer paso para diversos análisis de expresión génica. Con frecuencia, también se requieren estudios complementarios a nivel de proteínas. Normalmente, estos análisis se realizan utilizando diferentes alícuotas de la misma muestra experimental. Sin embargo, al trabajar con muestras raras, difíciles de obtener o muy pequeñas, a veces resulta poco práctico aislar el ARN y las proteínas nativas de forma independiente. En estudios que involucran un gran número de muestras, reactivos costosos o variabilidad inherente (p. ej.,...).
ej., transfección celular), la adición de muestras experimentales independientes no solo es costosa y requiere mucho tiempo, sino que también puede generar resultados inconsistentes. Para resolver estos problemas, se ha desarrollado el Sistema de Aislamiento de Proteínas y ARN (sistema PARIS™). Este sistema permite aislar tanto ARN como proteínas de la misma muestra experimental (véase la figura). Con el sistema PARIS™, se pueden aislar simultáneamente ARN y proteínas de lisados ​​celulares completos. Alternativamente, se pueden aislar ARN y proteínas de fracciones nucleares y citoplasmáticas separadas. El tejido o las células cultivadas se homogeneizan primero en tampón de disrupción celular helado para preparar un lisado celular total. Dado que la homogeneización se realiza rápidamente en hielo y en presencia de detergente, tanto la proteína como el ARN se pueden purificar directamente de este lisado. Para aislar el ARN, una parte del lisado celular total se mezcla inmediatamente con un volumen igual de solución de lisis/unión. A continuación, se purifica el ARN total de la mezcla utilizando un filtro de fibra de vidrio de unión de ARN. Tras tres lavados rápidos, se eluye el ARN de alta calidad en forma concentrada. El procedimiento completo se completa en menos de 20 minutos. Nota: Este kit no se recomienda para tejidos con altos niveles de ribonucleasas, como el páncreas.
Compatible con la mayoría de las aplicaciones posteriores. El ARN aislado de fracciones totales, nucleares o citoplasmáticas con el procedimiento PARIS™ puede utilizarse en diversas aplicaciones posteriores, como la hibridación por transferencia, la traducción in vitro, la síntesis de ADNc y la RT-PCR. Se recomienda un tratamiento con DNasa I para el ARN que se utilizará en experimentos de RT-PCR (ver Productos Accesorios). Las fracciones de proteína pueden utilizarse directamente para las aplicaciones más comunes, como ensayos funcionales, inmunoprecipitación, transferencia Western o electroforesis en gel bidimensional (ver Figuras).
Productos auxiliares: Los reactivos de tratamiento y eliminación de ADNasa TURBO™ DNA-free™ o DNA-free™ (SKU #AM1907 y AM1906, respectivamente) son ideales para eliminar rápidamente trazas de ADN de muestras de ARN total y nuclear sin extracción con fenol ni precipitación con alcohol. La fracción de ARN citoplasmático está prácticamente libre de contaminación por ADN.
Volumen de elución: 50 a 200 μL
Tipo de producto final: ARN total y proteína
Para usar con (aplicación): RT-PCR, qPCR, construcción de bibliotecas de ADNc, NGS, análisis de microarrays, hibridación de transferencia, transferencia Northern/Western, traducción in vitro, ensayos de protección de nucleasas, marcaje de ácidos nucleicos, ensayos enzimáticos, inmunoprecipitación, ensayos de desplazamiento de gel, electroforesis en gel 2D
Compatibilidad de alto rendimiento: No compatible con alto rendimiento (manual)
Tiempo de purificación: 20 min.
Cantidad: 50 preparaciones
Condición de envío: Temperatura ambiente
Cantidad de material de partida: Células: ≤107 células Tejido: ≤75 mg de tejido
Rendimiento: ≤1 μg por 105 células ≤10 μg por 1 mg de tejido
Tecnología de aislamiento: Columna de centrifugación (filtro de fibra de vidrio)
Tipo de muestra: células, tejido
Tamaño de la unidad: cada una