Thermo Fisher, AM1975, Kit de aislamiento de ácidos nucleicos totales RecoverAll™ para FFPE

Kit de aislamiento de ácido nucleico total RecoverAll™ para FFPE. El kit de aislamiento de ácido nucleico total RecoverAll™ para FFPE permite la extracción de ácido nucleico total de tejidos fijados con formalina o paraformalina e incluidos en parafina (FFPE). Incluye reactivos suficientes para 40 purificaciones de hasta cuatro secciones de 20 μm, o hasta 35 mg de muestras de núcleo sin seccionar cada una. Características del kit de aislamiento de ácido nucleico total RecoverAll™ para FFPE:
• Optimizado para el aislamiento de ácidos nucleicos totales, incluidos microARN, del tejido FFPE
• No se requiere digestión con proteinasa K durante la noche: desparafinar por la mañana y realizar qRT-PCR por la tarde
• Los rendimientos típicos son >50% de los del tejido no fijado.
Los ácidos nucleicos recuperados son adecuados para la secuenciación de nueva generación, la RT-PCR en tiempo real, la PCR, el cribado de mutaciones y los análisis de microarrays. Extracción de ácidos nucleicos de muestras complejas. Las muestras de tejido archivadas contienen información valiosa sobre enfermedades, pero tradicionalmente ha sido difícil aislar ácidos nucleicos de una calidad adecuada para el análisis molecular. Las técnicas de conservación estándar utilizan formalina, que mantiene la estructura del tejido y previene la putrefacción, pero que también atrapa los ácidos nucleicos y los modifica mediante enlaces cruzados proteína-proteína y proteína-ácido nucleico. El ARN (y en cierta medida el ADN) suele estar tan fragmentado y modificado químicamente que es incompatible con muchas técnicas de análisis molecular. La fragmentación del ARN en tejidos FFPE es irreversible; sin embargo, las condiciones de digestión con proteasa del kit RecoverAll™ están diseñadas para liberar la máxima cantidad (véase la figura) de fragmentos de ARN atrapados de todos los tamaños, incluido el microARN, en un tiempo relativamente corto.
La solución del kit de aislamiento de ácidos nucleicos totales RecoverAll™ requiere aproximadamente 45 minutos de práctica y, en el caso del ARN, se completa en menos de un día. Las muestras FFPE se desparafinan mediante una serie de lavados con xileno y etanol. A continuación, se someten a una digestión exhaustiva con proteasas con un tiempo de incubación adaptado para la recuperación de ARN o ADN. Los ácidos nucleicos se purifican mediante un método rápido de filtración en vidrio y se eluyen en agua o en un tampón hiposódico.
Ácidos nucleicos para prácticamente cualquier aplicación posterior. Como ocurre con todos los tejidos FFPE, la fijación y el almacenamiento de las muestras suelen provocar la fragmentación y modificación de los ácidos nucleicos. Por lo tanto, las aplicaciones posteriores, como el análisis de microarrays, que requieren ARN más puro que la qRT-PCR, pueden requerir modificaciones para obtener resultados óptimos. Aunque el ADN no suele fragmentarse tan fácilmente como el ARN, parece ser más reactivo a la formalina y requiere un tiempo de digestión con proteasa más prolongado (2 días) para liberar cantidades sustanciales de ADN.
Volumen de elución: 60 μL
Tipo de producto final: ARN y ADN totales
Para usar con (aplicación): RT-PCR, qPCR, construcción de bibliotecas de ADNc, NGS, análisis de microarrays, hibridación de transferencia, transferencia Northern/Southern, traducción in vitro, ensayos de protección de nucleasas, etiquetado de ácidos nucleicos, hibridación
Compatibilidad de alto rendimiento: No compatible con alto rendimiento (manual)
Tiempo de purificación: 45 min. (Práctica)
Cantidad: 40 preparaciones
Condición de envío: Caja 1: Temperatura ambiente Caja 2: Hielo seco
Cantidad de material de partida: ≤80 μM de cortes de tejido, 35 mg de núcleo sin seccionar
Rendimiento: ADN: ≤3.
5 μg por mg de FFPERNA: varía
Tecnología de aislamiento: Columna de centrifugación (filtro de fibra de vidrio)
Tipo de muestra: Tejido FFPE, tejido incluido en parafina (FFPE)
Tamaño de la unidad: cada una