Kit vectorial pSCREEN-iT™/lacZ-DEST Gateway™ de Thermo Fisher, V47020

Kit vectorial pSCREEN-iT™/lacZ-DEST Gateway™ Con el kit vectorial pSCREEN-iT™/lacZ-DEST Gateway™, puede:
• Evalúe la potencia de cualquier reactivo de supresión de ARNi utilizando un ensayo de reportero β-gal rápido, sensible y rentable
Identifique el mejor reactivo de silenciamiento para sus experimentos de ARNi sin conocer la función de la proteína, el Western blotting ni la qRT-PCR. Cómo funciona: El método del sistema de cribado de dianas de ARNi BLOCK-iT™ utiliza un ensayo de actividad de β-galactosidasa para medir la capacidad de silenciamiento de un reactivo de ARNi (ARNi Stealth RNAi™, ARNi, grupos de dicer o plásmidos con ARNhc). Para identificar el reactivo de silenciamiento más eficaz para su diana, simplemente clone su gen diana en el vector pSCREEN-iT™/lacZ-DEST Gateway™. Cotransfecte la construcción resultante con el reactivo de silenciamiento que se está analizando. Los genes expresados ​​se fusionarán a la β-galactosidasa, lo que le permitirá utilizar los niveles de β-galactosidasa para medir la degradación del gen diana inducida por ARNi (Figura 1). Cuanto más eficaz sea un reactivo de eliminación específico para mediar el ARNip, mayor será la degradación del ARNm de fusión, lo que reducirá la actividad de β-gal (Figura 2).
El sistema de cribado de dianas de ARNi BLOCK-iT™ incluye el vector pSCREEN-iT™/lacZ-DEST Gateway™ para generar un constructo que contiene la fusión de alacZ con el gen de interés. Este vector presenta:
• Sitios attR inmediatamente después del ORF lacZ para una recombinación rápida y eficiente con cualquier vector de entrada Gateway™ flanqueado por attL para generar fusiones del gen lacZ/objetivo
•El promotor CMV para una fuerte expresión de la fusión del gen lacZ/diana, lo que conduce a una mayor sensibilidad del ensayo y una mejor discriminación entre reactivos de eliminación de eficacia variada.
•Clonación posicional para fusionar un gen o fragmento al extremo 3' del gen lacZ, de modo que la β-galactosidasa se exprese incluso si el fragmento diana analizado contiene codones de terminación. Además, el vector pSCREEN-iT™/lacZ-DEST es totalmente compatible con la Colección de Clones ORF Ultimate™. Esto permite disponer de una amplia selección de posibles genes diana para generar fusiones lacZ.
Para usar con (aplicación): detección de dianas de ARNi
Formato: Kit
Tipo de producto: Sistema de análisis del gen reportero de β-galactosidasa
Cantidad: 20 Reacciones
Gen reportero: Beta-Gal (lacZ)
Tipo de muestra: siRNA sintético, plásmidos de ARNi (shRNA, miR)
Línea de productos: BLOCK-iT™, Gateway™
Promotor: CMV
Tamaño de la unidad: 20 reacciones