Thermo Fisher, 4444415, Sistema de detección del virus diminuto del ratón (MMV) ViralSEQ™

Thermo Fisher, 4444415, Sistema de Detección del Virus Minuto del Ratón (MMV) ViralSEQ™. El ensayo de detección del Virus Minuto del Ratón (MMV) ViralSEQ de Applied Biosystems forma parte de un sistema integrado de purificación de ADN y PCR en tiempo real para la detección rápida y sensible del MMV en una amplia gama de muestras. El ADN viral se aísla de una muestra utilizando el kit de extracción de ácidos nucleicos PrepSEQ 1-2-3 (disponible por separado). Posteriormente, se realiza una detección altamente sensible y específica del ADN viral mediante la tecnología de PCR en tiempo real TaqMan. El ensayo incluye una molécula de control positivo patentada que elimina la posibilidad de un resultado falso positivo debido a la contaminación accidental de la muestra con el control positivo.
Alta especificidad y rápida obtención de resultados. El ensayo ViralSEQ MMV detecta las cuatro cepas conocidas de MMV: i, p, m y c, incluyendo siete secuencias genómicas reportadas en la base de datos del NCBI. La Tabla 1 muestra la especificidad del ensayo ViralSEQ MMV y la ausencia de reactividad cruzada con ADN no relacionado. El flujo de trabajo del ensayo es sencillo y proporciona resultados en poco menos de 4 horas (Figura 1).
Proceso optimizado para la vigilancia y la detección temprana. El ensayo de detección de MMV ViralSEQ forma parte del Programa de Métodos Rápidos de Cultivos Celulares, diseñado para optimizar la detección de tres contaminantes comunes en la fabricación de productos biofarmacéuticos basados ​​en cultivos de células de mamíferos (Figura 2). El programa establece nuevos estándares de eficiencia y calidad del flujo de trabajo, combinando un solo paso de preparación de muestras con ensayos basados ​​en PCR en tiempo real para la detección de micoplasma, vesivirus y MMV en una sola plataforma instrumental.
Resultados fiables. El ensayo de detección de MMV ViralSEQ incluye un control positivo/de extracción discriminatorio de MMV, que consiste en un ADN plasmídico que contiene la secuencia de ADN de MMV reconocida por el ensayo de detección de MMV (sonda FAM). Este control (Figura 3) se diseñó para comportarse como el ADN de MMV tanto en la preparación de la muestra como en la detección. Además, se diseñó con una secuencia de unión adicional a la sonda VIC. La presencia de las señales FAM y VIC en una reacción de PCR permite discriminar un resultado positivo entre MMV (FAM) y el ADN de control (FAM y VIC). Este novedoso control permite realizar pruebas de control de adición de ADN sin riesgos, eliminando la posibilidad de un falso positivo debido a la contaminación cruzada accidental de una muestra con el ADN de control positivo.
Detección de bajo nivelEl ensayo de detección de MMV ViralSEQ utiliza tecnología TaqMan probada para una detección de alta sensibilidad de hasta 10 copias de ADN genómico de MMV por reacción de PCR (partículas virales equivalentes a 0.
002 TCID50). El análisis de diluciones seriadas de 10 veces del ADN genómico de MMV demuestra el amplio rango dinámico y la eficiencia del ensayo (Figuras 4 y 5).
Método superior de preparación de muestras. El kit de extracción de ácidos nucleicos PrepSEQ 1-2-3 (disponible por separado, n.° de cat. 4452222) permite una recuperación consistente y de alto porcentaje de ADN genómico de MMV en muestras complejas, como células CHO y suero bovino. La figura 6 muestra que los valores de Ct del ADN extraído de una muestra enriquecida fueron comparables a los de un control sin enriquecimiento amplificado mediante PCR en tiempo real, lo que demuestra la alta eficiencia de la recuperación de ADN con el kit PrepSEQ 1-2-3.
Número de reacciones: 100 reacciones
Línea de productos: ViralSEQ™
Tipo de producto: Sistema de detección de virus Mouse Minute
Cantidad: 100 reacciones
Tipo de muestra: ADN viral
Sensibilidad: ≥ 10 copias de ADN MMV
Condición de envío: Hielo seco
Especie: Ratón
Clase de organismo objetivo: Virus diminuto del ratón (MMV)
Especificidad del objetivo: Específico del objetivo
Método de detección: cebador-sonda
Rendimiento de PCR rico en GC: alto
Método de PCR: qPCR
Velocidad de reacción: estándar
Tamaño de la unidad: cada una