Agilent, GKE-5010B-2, AdvanceBio N-Glicanasa-plus (PNGasa F), ≥10 U/mL

AdvanceBio N-Glicanasa-plus (PNGasa F), ≥10 U/ml. La enzima (forma recombinante de la PNGasa F) libera N-glicanos intactos mediante la escisión entre la GlcNAc más interna y la Asn. Se suministra en 5 viales de GKE-5010B (5 x 400 mU, ≥10 U/ml, 1 mM EDTA). Incluye tampón de reacción de N-glicanasa 5x: fosfato sódico 100 mM, pH 7,5, azida sódica al 0,1 %; solución de desnaturalización: SDS al 2 %, 2-mercaptoetanol 1 M; solución de detergente: detergente al 15 %; tampón de reacción Tris de N-glicanasa 5x: Tris-HCl 50 mM, pH 8,0.

Presupuesto:
Concentración: 10 U/mL
Aplicaciones enzimáticas: Para lograr una desglicosilación eficiente de sustratos de glicoproteínas en condiciones no desnaturalizantes, es necesario utilizar una mayor concentración inicial de enzima. N-Glicanasa-plus y ULTRA (libre de EDTA) se suministran a ≥ 10 U/ml y se recomiendan para todas las aplicaciones que requieren la desglicosilación de glicoproteínas en ausencia de desnaturalizantes. Su alta actividad también permite explorar volúmenes de reacción más pequeños y tiempos de reacción más cortos.
Formulación enzimática: 20 mM Tris HCl pH 7,5, que contiene 1 mM EDTA y 50 mM NaCl
Fuente de la enzima: Gen recombinante de Elizabethkingia meningoseptica, expresado en E. coli. El microorganismo fuente se conocía anteriormente como Chryseobacterium [Flavobacterium] meningosepticum [1]. La enzima también se conoce como PNGasa F, péptido-N-glicosidasa F, péptido-N4-(N-acetil-β-glucosaminil)asparagina amidasa.
Actividad específica de la enzima: ≥10 unidades/mg
Especificidad enzimática: Escinde todos los oligosacáridos complejos, híbridos o ricos en manosa, a menos que tengan un núcleo fucosilado (1-3), como en los glicanos vegetales. La asparagina debe estar unida mediante enlaces peptídicos en ambos extremos. Los grupos fosfato, sulfato y ácido siálico unidos al oligosacárido no afectan la escisión. Libre de Endo F. Altamente concentrado, especialmente útil para la desglicosilación en condiciones nativas.
Definición de unidad enzimática: Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para catalizar la liberación de oligosacáridos ligados a N de 1 µmol de ribonucleasa B desnaturalizada por minuto a pH 7,5 y 37 °C.
Unidad: 2000 mU
Rango de pH: 7,5-9,5

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Esta enzima PNGasa F recombinante altamente purificada ofrece una eliminación eficiente y específica de los N-glicanos de las glicoproteínas en aplicaciones de investigación y biofarmacéuticas. Con una actividad de al menos 10 unidades por mililitro, la solución garantiza una desglicosilación rápida y fiable en condiciones nativas o desnaturalizantes, adaptándose a una amplia gama de tipos de muestra, incluyendo anticuerpos monoclonales y otras proteínas terapéuticas. La enzima logra la escisión completa de las cadenas de N-glicanos, lo que facilita la elaboración de perfiles detallados de glicanos y el análisis estructural mediante técnicas posteriores como HPLC, LC-MS y electroforesis capilar.

Diseñado para una integración perfecta con los flujos de trabajo de mapeo de glicanos de Agilent AdvanceBio, este reactivo facilita una preparación robusta de muestras antes del análisis cromatográfico o espectrométrico de masas. Su alta especificidad minimiza la escisión inespecífica, reduciendo la complejidad de la muestra y agilizando la interpretación de los datos. Compatible con una amplia gama de químicas de marcaje de glicanos y métodos de purificación, es ideal para laboratorios que realizan caracterización de glicoproteínas, desarrollo de bioprocesos, comparación de biosimilares y control de calidad.

Optimizada para su uso con la amplia gama de columnas e instrumentos analíticos AdvanceBio de Agilent, así como con los kits de análisis de glicanos relacionados, esta enzima ofrece un rendimiento constante y resultados reproducibles para respaldar entornos de investigación y laboratorio regulados.