BD, 550003, BD Pharmingen™ FITC Ig de rata antirratón, cadena ligera κ

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: SD de rata, también conocido como Sprague-Dawley (exogámico) IgG1, κ
Inmunógeno: IgG2b κ de ratón secretada por el plasmocitoma MPC-11
Aplicación: Citometría de flujo, tinción intracelular (citometría de flujo) (probada rutinariamente)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_393527
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: El mAb 187.1 conjugado con FITC puede usarse como reactivo primario o secundario en la tinción inmunofluorescente. PROTOCOLO DE TINCIÓN INMUNOFLUORESCENTE DE INMUNOGLOBULINA (Ig) INTRACELULAR 1. Prepare una suspensión de células individuales y determine el número de células. 2. Suspenda las células en el tampón de tinción (PBS + 2% FBS + 0.1% Azida sódica) a 2 × 10⁻¹ células/ml y transfiéralas a microplacas de fondo en U a 50 µl/pocillo para la tinción inmunofluorescente. Nota: El tampón de tinción BD Pharmingen™ con FBS (n.° de cat. 554656) es eficaz como tampón de tinción en este protocolo. 3. Bloquee los receptores Fcγ añadiendo 0,2 µg de anticuerpo 2.4G2 purificado (Mouse BD Fc Block™, mAb 2.4G2 anti-CD16/CD32 de ratón purificado) (n.º de cat. 553141/553142) en 50 µl de tampón de tinción a cada pocillo. 4. Incube 5 minutos en hielo. 5. Añada 200 µl de tampón de tinción por pocillo y resuspenda las células. Centrifugue a 250 × g durante 5 minutos y aspire el sobrenadante. 6. Bloquee la Ig de superficie con el mAb 187.1 purificado (n.º de cat. 559749) añadiendo 1,0 µg por muestra en 50 µl de tampón de tinción por pocillo. Nota: Los marcadores de superficie pueden teñirse durante este paso, como se describe en "Tinción inmunofluorescente de leucocitos de ratón y rata para citometría de flujo" en la sección "Protocolos técnicos" de nuestro sitio web: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Mouse_and_Rat_Leukocytes.shtml. 7. Incubar durante 15 minutos en hielo. 8. Lavar dos veces como se describe en el paso 5. 9. Resuspender las células en 100 µl de tampón de tinción intracelular BD Cytofix/Cytoperm™ (kit BD Cytofix/Cytoperm™, n.º de cat. 554714) por pocillo. 10. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. 11. Lave dos veces con 200 µl de tampón de tinción 1× Perm/Wash (incluido en el kit BD Cytofix/Cytoperm) por pocillo. Centrifugue a 250 ×g durante 5 minutos y aspire el sobrenadante entre lavados. 12. Teñir la Ig intracelular añadiendo ≤ 1 µg de mAb 187.1 conjugado con FITC en 50 µl de tampón de tinción 1× Perm/Wash por pocillo. Nota: Se pueden añadir otros anticuerpos recomendados para la tinción de marcadores intracelulares durante este paso, como se describe en el paso 12. 13. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. 14. Lavar dos veces como se describe en el paso 11. 15. Resuspender y transferir las muestras en 100 µl de tampón de tinción a tubos adecuados para el análisis con un citómetro de flujo. Lleve el volumen de cada tubo a 400 µl con tampón de tinción. 16. Analice las muestras en un citómetro de flujo.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías.