BD, 550891, BD Pharmingen™ Bromodesoxiuridina (BrdU)

Preparación y almacenamiento: Conservar el producto a -80 °C antes de su uso o para el almacenamiento prolongado de soluciones madre. Esta preparación no contiene conservantes, por lo que debe manipularse en condiciones asépticas. Evitar las congelaciones y descongelaciones repetidas del producto. Se suministran cinco viales. Cada vial contiene 0,5 ml de una solución de BrdU de 10 mg/ml diluida en DPBS 1X. Una vez descongelada, la solución de BrdU se mantiene estable a 4 °C durante 4 meses.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Antes de la inmunotinción con BrdU para detectar células proliferantes, es necesario marcar las células o el tejido con BrdU. El marcaje se puede realizar in vitro para cultivos celulares o in vivo para animales de experimentación. Se proporcionan ambos protocolos. Marcaje in vitro de células cultivadas y líneas celulares con BrdU Se han descrito muchos protocolos diferentes para el marcaje in vitro de células con BrdU. Hemos descubierto que incubar células con BrdU a una concentración final de 10 µM en medio de cultivo celular es eficaz para marcar una amplia variedad de líneas celulares humanas y de ratón y poblaciones de células normales. Para marcar células in vitro, añada con cuidado 10 µl de una solución de trabajo de BrdU 1 mM (diluya la solución madre de BrdU 1:30 en medio de cultivo tisular) directamente a cada ml de medio de cultivo tisular. Para este paso, es importante evitar alterar las células de cualquier forma (p. ej., mediante pasos de centrifugación o cambios de temperatura) que puedan interrumpir sus patrones normales de ciclo celular. La densidad del cultivo celular no debe exceder 2 x 10e6 células/ml. Las células tratadas se incuban entonces durante el tiempo deseado. El tiempo de incubación con BrdU depende de la tasa de entrada y progresión del ciclo celular de la población de células de prueba. Por ejemplo, un tiempo efectivo para pulsar una línea celular que prolifera activamente (p. ej., células CTLL-2) es de 30 a 45 minutos (es decir, cuando las células están en la fase logarítmica de proliferación celular). Los investigadores deben determinar los tiempos de incubación que son óptimos para cada línea celular o población celular diferente dentro de un sistema experimental particular. Las células de la misma población que no están marcadas con BrdU son el control de tinción celular negativo. Marcaje in vivo de células de ratón con BrdU Dos métodos comunes utilizados para el marcaje in vivo de tejidos y células con BrdU incluyen la inyección intraperitoneal de una solución que contiene BrdU en ratones y la alimentación de ratones con BrdU que se agrega a su agua potable. a) Método intraperitoneal: Se proporciona una solución de 10 mg/ml de BrdU en DPBS 1X estéril para uso in vivo. Inyecte a los ratones ip con 100-200 µl (1-2 mg) de solución de BrdU. La incorporación de BrdU se puede detectar en el timo y la médula ósea en tan solo 1 hora después de la inyección. 24 horas después de la inyección, se puede detectar BrdU en la mayoría de los tejidos. b) Método de agua potable: Diluya BrdU a 0,8 mg/ml en el agua potable. La mezcla de BrdU debe prepararse fresca y cambiarse diariamente. La alimentación prolongada de BrdU puede tener efectos tóxicos. Algunos investigadores han informado efectos letales asociados con 14 días de alimentación continua con BrdU. Para estudios a más largo plazo, algunos investigadores han informado que la alimentación de ratones con BrdU durante 9 días consecutivos seguido de un cambio a agua normal ha funcionado eficazmente. La incorporación de BrdU por las células de estos animales se ha detectado después de 70 días.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS).