BD, 550914, Kit de apoptosis de caspasa-3 activa de BD Pharmingen™ PE

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo)
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_393957
Descripción: Descripción La familia de las caspasas de las cisteína proteasas desempeña un papel clave en la apoptosis y la inflamación. La caspasa-3 es una proteasa clave que se activa durante las primeras etapas de la apoptosis y, al igual que otros miembros de la familia de las caspasas, se sintetiza como una proenzima inactiva que se procesa en las células en apoptosis mediante autoproteólisis y/o escisión por otra proteasa. Las formas procesadas de las caspasas consisten en subunidades grandes (17-22 kDa) y pequeñas (10-12 kDa) que se asocian para formar una enzima activa. La caspasa-3 activa, un marcador de células en apoptosis, consiste en un heterodímero de subunidades de 17 y 12 kDa que se deriva de la proenzima de 32 kDa. La caspasa-3 activa escinde y activa proteolíticamente otras caspasas, así como dianas relevantes en el citoplasma, como D4-GDI y Bcl-2, y en el núcleo (como PARP). Se ha descrito que este anticuerpo reconoce específicamente la forma activa de la caspasa-3 en células humanas y murinas. No se ha descrito que reconozca la forma proenzimática de la caspasa-3.
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Inducción de apoptosis por camptotecina Materiales 1. Prepare una solución madre de camptotecina 1,0 mM (Sigma-Aldrich Cat. No. C-9911) en DMSO. La camptotecina, un extracto del árbol chino Camptotheca acuminata, es un potente inhibidor de la topoisomerasa I, una molécula necesaria para la síntesis de ADN. Se ha informado que la camptotecina induce apoptosis de manera dependiente de la dosis in vitro. 2. Células Jurkat (leucemia de células T humanas; ATCC TIB-152). Procedimiento 1. Agregue camptotecina (concentración final de 4-6 µM) a 1x10^6 /ml de células Jurkat en proliferación. 2. Incubar las células durante 4 horas a 37 °C. Procedimiento del protocolo de tinción de caspasa-3 activa 1. Determine la cantidad total de muestras experimentales (pruebas) y calcule la cantidad de tampón BD Perm/Wash™ (1X) y anticuerpo que necesitará para que cada prueba tenga 100 µl de tampón BD Perm/Wash™ (1X) y 20 µl de anticuerpo (consulte la tabla). 2. Diluya la cantidad necesaria de tampón BD Perm/Wash™ (10X) 1:10 en agua destilada antes de usar. Nota: Ocasionalmente, puede observarse precipitado con el tampón BD Perm/Wash™ (10X), lo que no afectará el rendimiento del tampón. El precipitado puede eliminarse filtrando la solución 1X a través de un filtro de 0,45 µm. 3. Lave las células dos veces con PBS 1X frío y, a continuación, resuspéndalas en solución BD Cytofix/Cytoperm™ a una concentración de 1 x 10^6 células/0,5 ml. 4. Incube las células durante 20 min en hielo. 5. Sedimente las células, aspire y deseche la solución BD Cytofix/Cytoperm™; lave dos veces con tampón BD Perm/Wash™ (1X) a un volumen de 0,5 ml de tampón/1 x 10^6 células a temperatura ambiente. 6. Resuspenda las células en el tampón BD Perm/Wash™ (1X) calculado anteriormente más el anticuerpo e incube durante 30 min a temperatura ambiente. 7. Lave cada prueba en 1,0 ml de tampón BD Perm/Wash™ (1X), a continuación, resuspéndala en 0,5 ml de tampón BD Perm/Wash™ (1X) y analice mediante citometría de flujo. Peligro: La solución de fijación y permeabilización Cytofix/Cytoperm (1X) (componente 51-6896KC) contiene 4,2 % de formaldehído. Indicaciones de peligro Nocivo si se inhala. Provoca irritación cutánea. Provoca lesiones oculares graves. Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Se sospecha que provoca defectos genéticos. Puede provocar cáncer. Vía de exposición: Inhalatorio. Puede causar irritación respiratoria. Consejos de precaución: Llevar ropa protectora/protección ocular. Llevar guantes de protección. No respirar la niebla/los vapores/el aerosol. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando. En caso de irritación o sarpullido en la piel: Consultar a un médico.
Avisos del producto: Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente utilizamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
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