BD, 550937, BD Pharmingen™ Anti-CD197 humano purificado de ratón (CCR7)

Nombre alternativo: CCR7, BLR-2, EBI-1 y CMKBR7
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgM de ratón, κ
Inmunógeno: células de linfoma de ratón L1.2 transfectadas con CCR7 humano
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_393968
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. Conservar sin diluir a 4 °C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Se sabe que los receptores de quimiocinas se internalizan durante la manipulación, lo que resulta en una expresión de baja frecuencia. Los estudios de inmunofenotipado de los receptores de quimiocinas deben realizarse en sangre completa recién recolectada (<24 horas). La incubación con el anticuerpo debe realizarse en la oscuridad. Se ha demostrado que la manipulación celular, como la separación de Ficoll, la congelación o la exposición a temperaturas frías antes de la tinción, causa una disminución en la intensidad de la tinción y resultados inconsistentes. El anticuerpo 2H4 purificado se puede utilizar para la tinción inmunofluorescente y los análisis de citometría de flujo de leucocitos humanos y líneas celulares que expresan CCR7 (ver Figura). Se recomienda un procedimiento de tinción de varios pasos para amplificar las señales inmunofluorescentes para el análisis de citometría de flujo de la expresión de CCR7 humano: Paso 1: Incubar 10e6 células con 2 - 4 µg de anticuerpo 2H4 purificado a 4 °C durante 15 - 20 minutos. Lave las células dos veces con un medio de tinción que contenga azida sódica (p. ej., PBS de Dulbecco o medio de cultivo tisular [sin rojo fenol ni biotina] con azida sódica al 0,09 % y FCS inactivado por calor al 2 % o BSA al 0,2 %). Paso 2: incube las células con 0,25 µg de IgM de rata antirratón biotinilada (n.º de cat. 553406) a 4 °C durante 20 minutos. Lave las células dos veces. Paso 3: incube las células con ≤ 0,06 µg de estreptavidina-ficoeritrina (n.º de cat. 554061) a 4 °C durante 20 minutos. Lave dos veces. Resuspenda las células en el medio de tinción y analice mediante citometría de flujo utilizando los controles de especificidad y compensación adecuados.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías.