BD, 551520, Partículas magnéticas anti-CD19 humanas BD IMag™ - DM

Nombre alternativo: B4; Antígeno de linfocitos B CD19; Leu-12
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Aplicación: Separación de células (probada rutinariamente)
Número de taller: V CD19.11
ID de registro: AB_398515
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo o la estreptavidina se conjugaron con las partículas magnéticas en condiciones óptimas y se eliminó el anticuerpo/estreptavidina no conjugado.
Procedimientos de ensayo recomendados: Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se marcan con partículas anti-CD19 humanas BD IMag™ - DM según el protocolo de marcaje magnético. Esta suspensión celular marcada se coloca entonces dentro del campo magnético del imán de separación celular BD IMag™ (n.º de cat. 552311). Las células marcadas migran hacia el imán (fracción positiva), dejando las células no marcadas en suspensión para que puedan extraerse (fracción negativa). A continuación, se retira el tubo del campo magnético para la resuspensión de la fracción positiva. La separación se repite dos veces para aumentar la pureza de la fracción positiva. Los pasos de la separación magnética se diagraman en el diagrama de flujo de separación. Después de lavar la fracción positiva, el pequeño tamaño de las partículas magnéticas permite que la fracción positiva se evalúe más a fondo en aplicaciones posteriores, como la citometría de flujo. PROTOCOLO DE MARCAJE MAGNÉTICO 1. Prepare PBMC a partir de sangre humana anticoagulada, preferiblemente mediante centrifugación en gradiente de densidad con Ficoll-Paque™. Elimine los grumos de células o residuos pasando la suspensión a través de un filtro de nailon de 70 µm. 2. Diluya el tampón BD IMag™ (10X) (n.° de cat. 552362) 1:10 con agua destilada estéril o prepare el tampón BD IMag™ 1X complementando la solución salina tamponada con fosfato con BSA al 0,5 %, EDTA 2 mM y azida sódica al 0,09 %. Consérvese a 4 °C. 3. Lave las células con un exceso de volumen de tampón BD IMag™ 1X y aspire cuidadosamente todo el sobrenadante. 4. Agite bien las partículas BD IMag™ anti-CD19 humano - DM y añada 50 µl de partículas por cada 10^7 células totales. 5. Mezcle bien. Incube a temperatura ambiente durante 30 minutos. 6. Aumente el volumen de marcado de partículas BD IMag™ a 1-8 x 10^7 células/ml con tampón BD IMag™ 1X y coloque inmediatamente el tubo en el imán de separación celular. Incube de 8 a 10 minutos. 7. Con el tubo en el imán de separación celular, aspire cuidadosamente el sobrenadante. Este sobrenadante contiene la fracción negativa. 8. Retire el tubo del imán de separación celular y añada tampón BD IMag™ 1X al mismo volumen que en el paso 6. Resuspenda las células con cuidado pipeteando hacia arriba y hacia abajo y vuelva a colocar el tubo en el imán de separación celular durante 2-4 minutos más. 9. Con el tubo en el imán de separación celular, aspire con cuidado el sobrenadante y deséchelo. 10. Repita los pasos 8 y 9. 11. Tras el último paso de lavado, resuspenda la fracción positiva en un tampón o medio adecuado y proceda con las aplicaciones posteriores deseadas. La concentración de partículas BD IMag™ anti-CD19 humano - DM sugerida en este protocolo se ha optimizado para la purificación de linfocitos B CD19 positivos de sangre periférica humana. Al marcar poblaciones de células diana presentes a frecuencias más bajas, se pueden utilizar menos partículas BD IMag™. Por el contrario, al marcar poblaciones de células diana presentes a frecuencias más altas, se deben utilizar más partículas. Para determinar la concentración óptima de partículas anti-CD19 humanas BD IMag™ - DM para una aplicación específica, se recomienda una titulación en incrementos de dos. NOTA: Evite el etiquetado inespecífico trabajando rápidamente y minimizando los tiempos de incubación.
Avisos del producto: Las partículas BD IMag™ se preparan a partir de partículas magnéticas carboxifuncionalizadas, fabricadas por Skold Technology y con licencia de patente estadounidense número 7,169,618. Ficoll-Paque es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.