BD, 552175, BD Pharmingen™ Anti-CCR7 humano purificado de rata (CD197)

Nombre alternativo: CCR7, BLR-2, EBI-1, CMKBR7
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgG2a de rata, κ
Inmunógeno: proteína CCR7 humana
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_394353
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Se sabe que los receptores de quimiocinas se internalizan durante la manipulación, lo que resulta en una expresión de baja frecuencia. Los estudios de inmunofenotipado de los receptores de quimiocinas deben realizarse en sangre completa recién extraída (<24 h). La incubación con el anticuerpo debe realizarse en la oscuridad. Se ha demostrado que la manipulación celular, como la separación con Ficoll, la congelación o la exposición a bajas temperaturas antes de la tinción, causa una disminución en la intensidad de la tinción y resultados inconsistentes. El anticuerpo 3D12 purificado puede utilizarse para la tinción inmunofluorescente y los análisis de citometría de flujo de leucocitos humanos y líneas celulares que expresan CCR7 (véase la figura). Se recomienda encarecidamente un procedimiento de tinción de varios pasos para amplificar las señales inmunofluorescentes para el análisis citométrico de flujo de la expresión de CCR7 humano: 1. Incubar 10e6 células con 0,1-0,5 µg de CCR7 antihumano de rata purificado (CD197) a 4 °C durante 15-20 minutos. Lavar las células dos veces con un medio de tinción que contenga azida sódica (p. ej., PBS de Dulbecco o medio de cultivo tisular [sin rojo fenol ni biotina] con 0,09 % de azida sódica y 2 % de FCS inactivado por calor o 0,2 % de BSA). 2. Incubar las células con 0,25 µg de IgG2a anti-rata de ratón con biotina (n.º de cat. 553894) a 4 °C durante 20 minutos. Lavar las células dos veces. 3. Incubar las células con ≤ 0,06 µg de estreptavidina-ficoeritrina (n.° de cat. 554061) a 4 °C durante 20 minutos. Lavar dos veces. Resuspender las células en el medio de tinción y analizar las células teñidas con un citómetro de flujo FACScan™ (BDIS, San José, CA) utilizando los controles de especificidad y compensación adecuados.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. La azida sódica es un inhibidor reversible del metabolismo oxidativo; por lo tanto, las preparaciones de anticuerpos que contienen este conservante no deben utilizarse en cultivos celulares ni inyectarse en animales. La azida sódica puede eliminarse lavando las células teñidas o el anticuerpo unido a la placa, o dializando el anticuerpo soluble en un tampón sin azida sódica. Dado que la endotoxina también puede afectar los resultados de los estudios funcionales, recomendamos el formato de anticuerpo NA/LE (sin azida/bajo endotoxina), si está disponible, para uso in vitro e in vivo. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.