BD, 552311, Imán de separación celular BD IMag™

Aplicación: Separación de células (probada rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_2868958
Descripción: El imán de separación celular BD IMag™ es una gradilla de plástico especializada para tubos de ensayo que rodea un potente imán permanente de tierras raras. Sostiene hasta seis tubos de ensayo de fondo redondo de 12 x 75 mm o dos de 17 x 100 mm en una posición óptima para la separación magnética de leucocitos marcados con partículas BD IMag™ (DM). Al colocar los tubos con suspensiones celulares marcadas con BD IMag™ en el imán, el campo magnético atrae las células marcadas a las paredes adyacentes, lo que permite la eliminación del sobrenadante que contiene células no marcadas. Al retirar los tubos del imán, se pueden recolectar las células marcadas. Este sencillo sistema permite una selección positiva o negativa rápida y eficaz de las poblaciones de leucocitos deseadas. El imán de separación celular contiene un potente imán permanente que puede afectar o dañar instrumentos delicados, equipos electrónicos y dispositivos de registro magnético. Por lo tanto, las personas con marcapasos no deben manipular el imán separador de células, ni colocarlo cerca de instrumentos de laboratorio, monitores, discos de computadora, tarjetas de crédito, casetes de video o audio, ni relojes. El imán separador de células tiene una fuerte atracción por los metales férricos, por lo que no debe colocarse sobre superficies de acero ni cerca de objetos que contengan acero o hierro. Al igual que todos los instrumentos de precisión que contienen plástico, el imán separador de células puede deformarse o dañarse por la exposición al calor excesivo o a la luz ultravioleta. Si es necesario desinfectarlo, puede limpiarse con soluciones de alcohol o lejía. No lo hierva, esterilice en autoclave ni lo exponga a la luz ultravioleta artificial.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Las partículas BD IMag™ - DM son óptimas para su uso con el imán de separación celular. Se adjunta un protocolo detallado para la selección positiva y negativa. No se deben utilizar partículas BD IMag™ - MSC. Para la selección negativa de subconjuntos de leucocitos, se seleccionan anticuerpos para marcar la(s) población(es) celular(es) que no se desean. Las partículas BD IMag™ - DM conjugadas con anticuerpo o el anticuerpo biotinilado más partículas BD IMag™ - DM de estreptavidina se utilizan para marcar la suspensión celular, y las células marcadas se resuspenden en tampón BD IMag™ 1X. El tubo o los tubos que contienen las células marcadas se colocan entonces en el imán de separación celular, donde las células marcadas son atraídas por el imán y las células deseadas permanecen suspendidas en el sobrenadante. Con el tubo o los tubos en el imán de separación celular, se cosecha el sobrenadante para obtener la población leucocitaria deseada. Para la selección positiva de subconjuntos de leucocitos, se seleccionan anticuerpos para marcar la población celular deseada. Se utilizan partículas BD IMag™ conjugadas con anticuerpo -DM o anticuerpo biotinilado más partículas BD IMag™ de estreptavidina -DM para marcar la suspensión celular, y las células marcadas se resuspenden en tampón BD IMag™ 1X. El tubo o los tubos que contienen las células marcadas se colocan entonces en el imán de separación celular, donde las células deseadas son atraídas por el imán. Con el tubo o los tubos en el imán de separación celular, se retira el sobrenadante para descartar los leucocitos no deseados. Luego, el tubo se retira del imán de separación celular para permitir la recolección de las células deseadas. PROTOCOLO DE IMÁN DE SEPARACIÓN CELULAR Este protocolo es adecuado para la separación de suspensiones de células individuales de 1 x 10e7 a 2 x 10e8 leucocitos en 0,5 a 10 ml. 1. Etiquete los pares de tubos adecuadamente para recolectar las fracciones positivas y negativas y colóquelos en hielo. Diluya el tampón BD IMag™ (10X) (n.° de cat. 552362) 1:10 con agua destilada estéril o prepare tampón BD IMag™ 1X desde cero (solución salina tamponada con fosfato, 0,5 % de BSA, 2 mM de EDTA y 0,09 % de azida sódica) y colóquelo en hielo. Los pasos 2 a 5 deben realizarse tanto para la selección positiva como para la negativa. 2. Después de marcar las células con partículas BD IMag™ - DM, ajuste la concentración celular a 2 x 10⁻¹ células/ml con tampón BD IMag™ 1X frío. 3. Transfiera la suspensión celular marcada con BD IMag™ al/los tubo(s) de recolección de fracción positiva: - Tubo de 12 x 75 mm: volumen mínimo de 0,5 ml y volumen máximo de 3,5 ml - Tubo de 17 x 100 mm: volumen mínimo de 3,0 ml y volumen máximo de 10 ml 4. Coloque el/los tubo(s) de fracción positiva en el/los soporte(s) de tubo adecuado(s) en el imán de separación celular - Tubo de 12 x 75 mm: déjelo en el imán de separación celular durante 6 minutos - Tubo de 17 x 100 mm: déjelo en el imán de separación celular durante 10 minutos 5. Con el/los tubo(s) de fracción positiva en el imán de separación celular, retire el sobrenadante (fracción negativa) con una pipeta Pasteur de vidrio y transfiera la fracción negativa al/los tubo(s) de fracción negativa. La separación celular negativa ha concluido. Si se desea una selección positiva, continúe con el paso 6. Si no se desea una selección positiva, vaya directamente al paso 11. 6. Retire el/los tubo(s) de fracción positiva del imán de separación celular y colóquelos en hielo. Para purificar aún más la fracción positiva, recomendamos la adición de los pasos 7 a 10. 7. Agregue 1 ml de tampón BD IMag™ 1X frío a cada tubo de fracción positiva. Resuspenda las células pipeteando o agitando con vórtex suavemente. Coloque el/los tubo(s) nuevamente en el imán de separación celular. - Tubo de 12 x 75 mm: déjelo en el imán de separación celular durante 2 minutos - Tubo de 17 x 100 mm: déjelo en el imán de separación celular durante 5 minutos 8. Con una pipeta Pasteur de vidrio nueva, retire el sobrenadante y deséchelo. 9. Repita los pasos 6, 7 y 8 una vez más. 10. Retire el/los tubo(s) de fracción positiva del imán de separación celular y colóquelo en hielo. Añada 1 ml de tampón BD IMag™ 1X frío a cada tubo de fracción positiva. Resuspenda las células pipeteando suavemente o agitando con vórtex. La separación de las células positivas ha concluido. 11. Las fracciones positivas y negativas pueden resuspenderse en los tampones adecuados para aplicaciones posteriores, como la citometría de flujo.
Avisos del producto: Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Las partículas BD IMag™ se preparan a partir de partículas magnéticas carboxifuncionalizadas, fabricadas por Skold Technology y registradas bajo la patente estadounidense n.° 7,169,618.