BD, 553399, BD Pharmingen™ FITC Anti-Ratón IgG2a/2b

Nombre alternativo: IgG2a (Ighg2a; Igh-1); IgG2b (Ighg2b; Igh-3; gamma2b)
Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: LOU de rata, también conocida como Louvain, LOU/C, LOU/M IgG1, κ
Inmunógeno: Ig de ratón agrupada
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente), tinción intracelular (citometría de flujo) (probada durante el desarrollo)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_394837
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados El FITC de rata anti-ratón IgG2a/2b puede usarse como reactivo primario o secundario en la tinción inmunofluorescente. PROTOCOLO DE TINCIÓN INMUNOFLUORESCENTE DE INMUNOGLOBULINA (Ig) INTRACELULAR 1. Prepare una suspensión de células individuales y determine el número de células. 2. Suspenda las células en tampón de tinción (PBS + 2% FBS + 0,1% azida sódica) a 2 × 10^7 células/ml y transfiéralas a microplacas de fondo en U a 50 µl/pocillo para la tinción inmunofluorescente. Nota: El tampón de tinción (FBS) (n.º de cat. 554656) es eficaz para su uso como tampón de tinción en este protocolo. 3. Bloquee los receptores Fcγ añadiendo 0,2 µg de anticuerpo antirratón CD16/CD32 purificado de rata (Mouse BD Fc Block™) (n.º de cat. 553141/553142) en 50 µl de tampón de tinción a cada pocillo. 4. Incube 5 minutos en hielo. 5. Añada 200 µl de tampón de tinción por pocillo y resuspenda las células. Centrifugue a 250 × g durante 5 minutos y aspire el sobrenadante. 6. Bloquee la Ig de superficie con anticuerpo antirratón IgG2a/2b purificado de rata (n.º de cat. 553397) añadiendo 1,0 µg por muestra en 50 µl de tampón de tinción por pocillo. Nota: Los marcadores de superficie pueden teñirse durante este paso como se describe en la sección "Tinción inmunofluorescente de leucocitos de ratón y rata para citometría de flujo" en los protocolos de "Flujo multicolor" en nuestro sitio web: http://www.bdbiosciences.com/us/s/resources. 7. Incubar 15 minutos en hielo. 8. Lavar 2 veces como se describe en el paso 5. 9. Resuspender las células en 100 µl de tampón de tinción intracelular BD Cytofix/Cytoperm™ (kit BD Cytofix/Cytoperm™, n.º de cat. 554714) por pocillo. 10. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente. 11. Lavar 2 veces con 200 µl de tampón de perfusión/lavado 1x (incluido en el kit BD Cytofix/Cytoperm) por pocillo. Centrifugue a 250 × g durante 5 minutos y aspire el sobrenadante entre lavados. 12. Tiña la Ig intracelular añadiendo ≤ 1 µg de mAb R2-40 conjugado con FITC en 50 µl de 1 × tampón de lavado/permeabilización por pocillo. Nota: Se pueden añadir otros anticuerpos recomendados para la tinción de marcadores intracelulares durante este paso, como se describe en el paso 12. 13. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 14. Lave 2 veces como se describe en el paso 11. 15. Resuspenda y transfiera las muestras en 100 µl de tampón de tinción a tubos adecuados para el análisis con un citómetro de flujo. Lleve el volumen de cada tubo a 400 µl con tampón de tinción. 16. Analice las muestras en un citómetro de flujo.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources.