BD, 553887, BD Pharmingen™ FITC IgM de ratón anti-rata

Reactividad: Rata (Prueba de control de calidad)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: Ig de rata agrupada
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_395116
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: El mAb G53-238 conjugado con FITC se puede utilizar como reactivo primario o secundario en la tinción inmunofluorescente. Para la detección de IgM intracitoplasmática mediante citometría de flujo, consulte el siguiente protocolo. PROTOCOLO DE TINCIÓN INMUNOFLUORESCENTE DE INMUNOGLOBULINA (Ig) INTRACELULAR 1. Prepare una suspensión de células individuales y determine el número de células. 2. Suspenda las células en tampón de tinción (PBS + 2% FBS + 0,1% azida sódica) a 2 x 10e7 células/ml y transfiéralas a microplacas de fondo en U a 50 µl/pocillo para la tinción inmunofluorescente. Nota: El tampón de tinción con FBS de BD Pharmingen (n.º de cat. 554656) es eficaz como tampón de tinción en este protocolo. 3. Bloquee los receptores Fcγ añadiendo el mAb D35-485 anti-CD32 de rata purificado Rat BD Fc Block (n.° de cat. 550270/550271) en 50 µl de tampón de tinción a cada pocillo. 4. Incube 5 minutos en hielo. 5. Añada 200 µl de tampón de tinción por pocillo y resuspenda las células. Centrifugue a 250 xg durante 5 minutos y aspire el sobrenadante. 6. Bloquee la Ig de superficie con el mAb G53-238 purificado (n.° de cat. 553885) añadiendo 1,0 µg por muestra en 50 µl de tampón de tinción por pocillo. Nota: Los marcadores de superficie pueden teñirse durante este paso como se describe en "Tinción inmunofluorescente de leucocitos de ratón y rata para citometría de flujo" en la sección "Protocolos técnicos" de nuestro sitio web: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Mouse_and_Rat_Leukocytes.shtml. 7. Incubar 15 minutos en hielo. 8. Lavar 2 veces como se describe en el paso 5. 9. Resuspender las células en 100 µl de tampón de tinción intracelular BD Cytofix/Cytoperm. (kit BD Cytofix/Cytoperm., n.º de cat. 554714) por pocillo. 10. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente. 11. Lavar 2 veces con 200 µl de tampón 1x Perm/Wash (incluido en el kit BD Cytofix/Cytoperm.) por pocillo. Centrifugue a 250 xg durante 5 minutos y aspire el sobrenadante entre lavados. 12. Tiña la Ig intracelular añadiendo ≤ 1 µg de mAb G53-238 conjugado con FITC en 50 µl de 1 x tampón de lavado/permeabilización/pocillo. Nota: Se pueden añadir otros anticuerpos recomendados para la tinción de marcadores intracelulares durante este paso, como se describe en el paso 12. 13. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 14. Lave 2 veces como se describe en el paso 11. 15. Resuspenda y transfiera las muestras en 100 µl de tampón de tinción a tubos adecuados para el análisis con un citómetro de flujo. Lleve el volumen de cada tubo a 400 µl con tampón de tinción. 16. Analice las muestras en un citómetro de flujo.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías.