BD, 554062, BD Pharmingen™ PE-Cy™5 Estreptavidina

Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Concentración: 0,2 mg/ml
ID de registro: AB_10053563
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. La estreptavidina se conjugó con el colorante en condiciones óptimas y se eliminaron la estreptavidina no conjugada y el colorante libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Se ha informado que los fluorocromos en tándem PE-Cy5 se unen a algunas clases de macrófagos y granulocitos humanos a través de receptores Fc, y que el PE se une a los linfocitos B murinos a través de receptores Fc. La preincubación de leucocitos murinos con anti-CD16/CD32 de rata purificado (Mouse BD Fc Block™) (n.º de cat. 553141/553142) puede reducir la unión inespecífica de los reactivos conjugados con PE-Cy5 a los linfocitos B murinos. Para el análisis de sangre periférica humana, la selección de poblaciones celulares específicas basada en la dispersión frontal y de luz, además de marcadores de linaje, puede ayudar a superar esta limitación. Además, hemos observado una interacción específica entre los fluorocromos en tándem PE-Cy5 y los esplenocitos de ratones SJL, NOD y MRL: los linfocitos B y otros subgrupos de leucocitos presentan una tinción intensa, y Mouse BD Fc Block™ no presenta un efecto significativo. Por lo tanto, no se deben utilizar reactivos conjugados con PE-Cy5 para teñir leucocitos de ratones SJL, NOD o MRL. Los reactivos conjugados con PE, PerCP, PerCP-Cy5.5, aloficocianina (APC) y el fluorocromo en tándem APC-Cy7 sí se pueden utilizar en leucocitos de estas cepas de ratones.
Avisos del producto: Avisos del producto Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para conocer los espectros de fluorocromos y los ajustes adecuados del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. PE-Cy5 es un fluorocromo en tándem compuesto de R-ficoeritrina (PE), que se excita con la luz de 488 nm de un láser de iones de argón y sirve como donador de energía, acoplado al colorante de cianina Cy5, que actúa como aceptor de energía y fluoresce a 670 nm. BD Biosciences Pharmingen ha maximizado la transferencia de energía del fluorocromo en PE-Cy5, maximizando así la intensidad de su emisión de fluorescencia, minimizando la emisión residual de PE y minimizando la variación entre lotes. El PE-Cy5 está optimizado para su uso con un único láser de iones de argón que emite luz de 488 nm. Debido al amplio espectro de absorción del fluorocromo en tándem PE-Cy5, se debe tener especial cuidado al utilizar citómetros de doble láser que puedan excitar directamente tanto el PE como el Cy5™. Tenga en cuenta las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que se produce en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver los viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, a la iluminación ambiental. Se ha descrito que los fluorocromos en tándem PE-Cy5 se unen a algunas clases de macrófagos y granulocitos humanos a través de receptores Fc, y que el PE se une a los linfocitos B de ratón a través de receptores Fc. La preincubación de leucocitos de ratón con el anticuerpo monoclonal anti-CD16/CD32 de ratón purificado Mouse BD Fc Block™ 2.4G2 puede reducir la unión inespecífica de los reactivos conjugados con PE-Cy5 a los linfocitos B de ratón. Sin embargo, no deben utilizarse reactivos conjugados con PE-Cy5 para teñir esplenocitos de ratones SJL, NOD y MRL, ya que se ha descrito que los linfocitos B u otros leucocitos presentan una tinción inespecífica independientemente del uso de Mouse BD Fc Block™ (el complejo CD72c se ha relacionado con la unión de PE-Cy5 en estas cepas). Los reactivos conjugados con PE, PerCP, PerCP-Cy5.5, APC y el fluorocromo en tándem APC-Cy7 pueden utilizarse en leucocitos de estas cepas de ratón. Cy es una marca registrada de GE Healthcare. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS). Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.