BD, 554654, Células de control positivo de citocina de ratón MiCK-3 de BD Pharmingen™

Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Concentración: 5x10^6 células/ml
ID de registro: AB_2869004
Tampón de almacenamiento: congelado en FBS y DMSO al 10%.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Almacene el producto a -80 °C antes de usarlo o para el almacenamiento a largo plazo de soluciones madre. Descongele y centrifugue rápidamente el producto antes de usarlo. Evite congelar y descongelar repetidamente el producto. Esta preparación no contiene conservantes, por lo que debe manipularse en condiciones asépticas. Al recibirla, almacene la suspensión celular a -80 °C. Alternativamente, la suspensión celular congelada puede descongelarse y el vial tapado debe centrifugarse rápidamente para asegurar la recuperación completa de su contenido. Después de resuspender completamente las células con una pipeta, las alícuotas de un solo uso pueden volver a congelarse y almacenarse (-80 °C) en microtubos de polipropileno para un momento posterior.
Procedimientos de ensayo recomendados: Las suspensiones celulares de control positivo MiCK-3 están diseñadas para proporcionar células que contienen acumulaciones intracelulares de IL-1α, IL-6, IL-12, MCP-1 o TNF, fácilmente detectables mediante tinción inmunofluorescente de citocinas intracelulares y citometría de flujo. Como tal, estas células sirven como controles positivos para verificar la actividad de unión de los anticuerpos fluorescentes anticitocinas y el propio procedimiento de tinción (p. ej., permeabilización). Para la tinción, la preparación celular congelada debe descongelarse primero rápida y cuidadosamente. Luego, se pueden transferir alícuotas de la suspensión celular a micropocillos o tubos. Las células fijadas y no permeabilizadas deben lavarse dos veces con tampón de tinción para eliminar el DMSO. Luego, las células deben incubarse durante 10 minutos, seguido de un lavado en tampón de permeabilización/lavado (BD Perm/Wash™, n.º de cat. 554723). Las células pueden luego teñirse con un conjugado fluorescente de ALF-161 (IL-1α antirratón de hámster; N.º de cat. 559810), MP5-20F3 (IL-6 antirratón de rata; N.º de cat. 554401), C15.6 (IL-12 p40/p70 antirratón de rata; N.º de cat. 554479 o N.º 554480), 2H5 (MCP-1 antirratón de hámster; N.º de cat. 554443), MP6-XT22 (TNF antirratón de rata; N.º de cat. 554418, N.º de cat. 554419 o N.º 554420). Nota: La tinción específica de citocinas en células MiCK-3 puede demostrarse mediante la preincubación de un anticuerpo específico de citocinas conjugado con citocina recombinante o mediante el pretratamiento de las células MiCK-3 con un anticuerpo bloqueador no marcado. Debido al procedimiento de activación celular, una pequeña proporción de células puede teñirse de forma inespecífica (es decir, no bloquearse ni con el anticuerpo ni con el ligando no marcados).
Avisos del producto: Evite el contacto con la piel y los ojos. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources.