BD, 554656, tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS)

Preparación y almacenamiento: Preparación y almacenamiento Conservar sin diluir a 4°C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Citometría de flujo (tinción de inmunofluorescencia directa): 1. Prepare suspensiones de células individuales de tejido linfoide, médula ósea, sangre periférica o cultivos celulares utilizando protocolos estándar. 2. Lave las células dos veces en tampón de tinción frío (FBS) y sedimente las células por centrifugación (p. ej., 300 x g a 4 °C). Resuspenda el sedimento celular con tampón de tinción frío (FBS) hasta una concentración final de 2 x 10e7 células/ml. 3. Distribuya alícuotas de 50 µl de la suspensión celular (10e6 células) en tubos o pocillos de fondo redondo de microplacas. 4. Diluya los anticuerpos fluorescentes a sus concentraciones óptimas predeterminadas en tampón de tinción (FBS) y agregue pequeñas alícuotas (p. ej., 10 µl) de los anticuerpos diluidos a los tubos o micropocillos que contienen las suspensiones de células diana. Incubar durante 20 minutos en hielo protegido de la luz. El tiempo de tinción puede aumentarse (≥ 45 min) dependiendo de la avidez del anticuerpo fluorescente. 5. Lavar las células dos veces con volúmenes de 200 µl (para placas de micropocillos) o 1 ml (para tubos) de tampón de tinción (FBS) para eliminar los anticuerpos no unidos. Centrifugar las células a 300 xg durante 5 min. Después de cada centrifugación, aspirar cuidadosamente (para placas de micropocillos o tubos) o invertir y secar (para tubos) los sobrenadantes de los pellets celulares. 6. Resuspender el pellet celular en volúmenes de 200 µl (para placas de micropocillos) o 0,5 ml (para tubos) de tampón de tinción (FBS). Transferir las células teñidas de las placas de micropocillos a los tubos apropiados para el análisis de citometría de flujo (ajustar el volumen final a ~0,5 ml). 7. Analice las muestras de células teñidas mediante citometría de flujo lo antes posible (p. ej., ≤ 4 horas) después de la tinción. Si debe retrasarse el análisis, las células teñidas pueden fijarse con paraformaldehído tamponado (p. ej., tampón de fijación BD Cytofix™; n.º de cat. 554655) y almacenarse a 4 °C (protegidas de la luz). Las células fijadas deben analizarse lo antes posible (p. ej., hasta una semana después de la tinción y la fijación). Nota 1: El tampón de tinción (FBS) puede utilizarse de forma similar para la tinción inmunofluorescente indirecta de células. En este caso, repita los pasos 4 y 5 cuando utilice anticuerpos primarios no marcados o biotinilados. Al teñir células con anticuerpos biotinilados y avidina conjugada con fluorocromo, es deseable utilizar un medio de tinción que no contenga biotina, como el tampón de tinción (BSA) (n.º de cat. 554657). Nota 2: El tampón de tinción (FBS) también puede utilizarse para la tinción inmunofluorescente de antígenos de superficie expresados ​​por células destinadas a ser fijadas y teñidas inmunofluorescentemente para antígenos intracelulares como las citocinas. Las células teñidas para citocinas intracelulares pueden resuspenderse y mantenerse (es decir, a 4 °C, protegidas de la luz) en tampón de tinción (FBS) antes del análisis por citometría de flujo.
Avisos del producto: Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.