BD, 555899, BD Pharm Lyse™ Tampón de lisis

Preparación y almacenamiento: Preparación y almacenamiento Almacenar sin diluir a 4 °C. Las soluciones diluidas 1X se pueden almacenar a 4 °C hasta por 30 días.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación de la solución de lisis 1X: Diluya el concentrado 10X 1:10 con agua destilada. El pH de la solución 1X debe estar dentro del rango de pH 7,1-7,4. Ajuste el pH si es necesario. Caliente la solución 1X a temperatura ambiente antes de usar. 100 ml de concentrado 10X rendirán una cantidad de solución 1X que es suficiente para lisar 500 muestras. Procedimiento de lisis: Nota: El siguiente procedimiento solo se aplica a la lisis de glóbulos rojos de sangre completa humana. Dado que las aplicaciones varían, para otras muestras como la lisis de glóbulos rojos de bazo de ratón (tiempo de incubación de lisis de hasta 3 minutos a 37 °C), lisis de glóbulos rojos de médula ósea, cada investigador debe optimizar la condición para obtener resultados óptimos. 1. Agregue 2,0 ml de solución de lisis 1X a cada tubo que contenga hasta 200 µl de una mezcla de sangre completa más anticuerpo monoclonal. 2. Agite suavemente cada tubo inmediatamente después de añadir la solución de lisis. 3. Incube a temperatura ambiente, protegido de la luz, durante 15 minutos. 4. Centrifugue a 200 X g durante 5 minutos. 5. Aspire con cuidado el sobrenadante, sin alterar el pellet. 6. Añada 2,0 ml de PBS 1X que contenga suero bovino fetal inactivado por calor al 1 % y azida sódica al 0,1 % (PBS-FBS). 7. Centrifugue a 200 X g durante 5 minutos. 8. Aspire con cuidado el sobrenadante, sin alterar el pellet. 9. Resuspenda el pellet en 0,5 ml de PBS-FBS o un fijador como formaldehído al 2 % para el análisis de citometría de flujo. Solución de problemas: La lisis incompleta puede ocurrir por varias razones: (1) La edad de la muestra puede afectar la lisis de los glóbulos rojos, (2) La solución de lisis 1X puede no haberse calentado a temperatura ambiente, o (3) Tras añadir la solución de lisis, las muestras pueden no haberse agitado lo suficiente. Si se produce una lisis incompleta (identificada por la presencia de una cantidad excesiva de glóbulos rojos visibles en la suspensión celular final lavada), repita el procedimiento de lisis. Sin embargo, no se recomienda realizar más de dos lisis.
Avisos del producto: Avisos del producto Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.