BD, 556027, BD Pharmingen™ Juego anti-Ki-67 para ratón PE

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo), Rata, Rhesus (reportado)
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_2266296
Descripción: Reconoce Ki-67, un antígeno asociado a la proliferación celular nuclear, expresado en todas las etapas activas del ciclo celular. Ki-67 se revela como una doble banda (345 y 395 kDa) en el análisis Western blot de células proliferantes. B56 se desarrolló utilizando un inmunógeno compuesto por el epítopo inmunodominante de la proteína Ki-67. Los anticuerpos B56 y MIB 1 reaccionan con este inmunógeno. El análisis de citometría de flujo revela que la unión de B56-PE puede ser bloqueada por el anticuerpo purificado MIB 1.
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Protocolo de tinción de Ki-67 por citometría de flujo: 1. Coseche, cuente y sedimente las células siguiendo los procedimientos estándar (Nota: Ki-67 se expresa en las células proliferativas. Es posible que no obtenga tinción con las células en reposo, p. ej., PBMC no estimuladas). 2. Mientras agita, agregue 5 ml gota a gota de etanol frío al 70% - 80% al sedimento de células (1-5 x 10e7 células). Luego incube a -20 °C durante 2 horas como mínimo. Estas células fijadas se pueden usar hasta 60 días después de la fijación (almacene a -20 °C). 3. Agregue 30-40 ml de tampón de lavado (PBS con 1% FBS, 0.09% NaN3 pH 7.2) a las células fijadas. Centrifugue las células durante 10 minutos a 1000 rpm y aspire el sobrenadante. Lave una vez más con 30-40 ml de tampón de lavado. Centrifugue a 1000 rpm durante 10 minutos y aspire el sobrenadante. 4. Resuspenda las células a una concentración de 1 X 10e7/ml (1 X 10e6/100 µl). 5. Transfiera 100 µl de suspensión celular a cada tubo nuevo. 6. Añada 20 µl de anticuerpo diluido adecuadamente según el protocolo en los tubos anteriores. Mezcle suavemente. 7. Incube los tubos a temperatura ambiente (TA) durante 20-30 minutos en la oscuridad. 8. Lave con 2 ml de tampón de lavado PBS a 1000 rpm durante 5 minutos. 9. Aspire el sobrenadante. 10. Para el anticuerpo conjugado directo: vaya a los pasos 13 y 14. 11. Para el anticuerpo purificado: añada 50 µl de anticuerpo secundario diluido a una concentración óptima (n.º de cat. 555988), incube a TA durante 30 minutos en la oscuridad. 12. Repita los pasos 8 y 9. 13. Añada 0,5 ml de tampón de lavado PBS a cada tubo. Para el anticuerpo conjugado con FITC, añada 10 µl de solución de tinción PI (n.° de cat. 556463); para el anticuerpo conjugado con PE, añada 20 µl de solución de viabilidad celular BD Via-Probe™ (n.° de cat. 555816) a cada tubo. 14. Analice la muestra con FACS.
Avisos del producto: Avisos del producto Este anticuerpo ha sido optimizado y preensayado con su control de isotipo coincidente para usarse en el volumen recomendado de 20 ul/prueba. NO se recomienda la titulación de los reactivos ni la sustitución con otro control de isotipo (no coincidente). Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. La reactividad cruzada de especies detectada en el desarrollo del producto puede no haber sido confirmada en todos los formatos y/o aplicaciones. Para conocer los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
N/D : 100.0 : N/D : N/D