BD, 556353, BD Pharmingen™ Anti-MDM2 de ratón purificado

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón, Rata (reportada)
Isotipo: IgG1 de ratón
Inmunógeno: MDM2 humano aa. 154-167
Aplicación: Western blot (probado rutinariamente), bioimagen, inmunoprecipitación (probado durante el desarrollo), inmunohistoquímica-formalina (requiere recuperación de antígeno), inmunohistoquímica-congelado (reportado)
Peso molecular objetivo: 95 kDa
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_396380
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Bioimagen 1. Siembre las células en un medio de cultivo adecuado a ~10 000 células por pocillo en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y fije las células añadiendo 100 μl de tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo. Incube durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y permeabilice las células utilizando BD Perm Buffer III, metanol al 90 % o Triton™ X-100: a. Añada 100 μl de metanol al 90 % a -20 °C o Perm Buffer III (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incube durante 5 minutos a TA. O b. Añada 100 μl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incube durante 5 minutos a TA. 4. Retire el tampón de permeabilización y lave los pocillos dos veces con 100 μl de PBS 1×. 5. Retire el PBS y bloquee las células añadiendo 100 μl de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) a cada pocillo. Incube durante 30 minutos a TA. 6. Retire el tampón de bloqueo y añada 50 μl del anticuerpo primario titulado óptimamente (diluido en tampón de tinción) a cada pocillo e incube durante 1 hora a TA. 7. Retire el anticuerpo primario y lave los pocillos tres veces con 100 μl de PBS 1×. 8. Retire el PBS y añada el reactivo del segundo paso a su concentración óptima titulada en 50 μl a cada pocillo. Incube en oscuridad durante 1 hora a temperatura ambiente. 9. Retire el reactivo del segundo paso y lave los pocillos tres veces con 100 μl de PBS 1×. 10. Retire el PBS y realice una contratinción de los núcleos añadiendo 200 μl por pocillo de 2 μg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich Cat. N.º B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la adquisición de la imagen. 11. Observe y analice las células en un instrumento de adquisición de imagen adecuado. Bioimágenes: para obtener información más detallada, consulte http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp Western blot: para obtener información más detallada, consulte http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para aplicaciones de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para obtener un rendimiento óptimo. Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.