BD, 557769, Partículas magnéticas anti-CD14 humanas BD IMag™ - DM

Nombre alternativo: Receptor de LPS; LPS-R; Glicoproteína rica en leucina específica de las células mieloides
Reactividad: Humana (Prueba de control de calidad), Rh (Reportada)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG2b, κ
Inmunógeno: Monocitos humanos
Aplicación: Separación de células (probada rutinariamente)
Número de taller: I M35; II M67; III M337; IV M301
ID de registro: AB_398631
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo o la estreptavidina se conjugaron con las partículas magnéticas en condiciones óptimas y se eliminó el anticuerpo/estreptavidina no conjugado.
Procedimientos de ensayo recomendados: Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se marcan con partículas magnéticas BD IMag™ anti-CD14 humana - DM de acuerdo con el protocolo de marcaje magnético. Luego, esto se coloca dentro del campo magnético del imán de separación celular BD IMag™ (n.º de cat. 552311). Las células marcadas migran hacia el imán (fracción positiva), dejando las células no marcadas en suspensión para que puedan extraerse (fracción negativa). Luego, el tubo se retira del campo magnético para la resuspensión de la fracción positiva. La separación se repite dos veces para aumentar la pureza de la fracción positiva. Los pasos de la separación magnética se diagraman en el diagrama de flujo de separación. Después de lavar la fracción positiva, el pequeño tamaño de las partículas magnéticas permite que la fracción positiva se evalúe más a fondo en aplicaciones posteriores, como la citometría de flujo. PROTOCOLO DE MARCAJE MAGNÉTICO 1. Prepare PBMC a partir de sangre humana (o de macaco rhesus) anticoagulada, preferiblemente mediante centrifugación en gradiente de densidad con Ficoll-Paque™.* 2. Diluya el tampón BD IMag™ (10X) (n.° de cat. 552362) 1:10 con agua destilada estéril o prepare tampón BD IMag™ 1X complementando la solución salina tamponada con fosfato con BSA al 0,5 %, EDTA 2 mM y azida sódica al 0,09 %. Conserve a 4 °C. 3. Cuente las células, lávelas con un exceso de volumen de tampón BD IMag™ 1X y aspire cuidadosamente todo el sobrenadante. 4. Agite bien las Partículas Magnéticas BD IMag™ Anti-Human CD14 - DM y añada 50 µl de partículas por cada 10⁻¹ células totales.† 5. MEZCLE COMPLETAMENTE. Incube a temperatura ambiente durante 30 minutos.‡ 6. Aumente el volumen de marcado de las partículas BD IMag a 1-8 x 10⁻¹ células/ml con tampón BD IMag™ 1X y coloque inmediatamente el tubo en el Imán de Separación Celular. Incube de 8 a 10 minutos. 7. Con el tubo en el Imán de Separación Celular, aspire cuidadosamente el sobrenadante. Este sobrenadante contiene la fracción negativa. 8. Retire el tubo del imán de separación celular y añada tampón BD IMag™ 1X al mismo volumen que en el paso 6. Resuspenda las células con cuidado pipeteando hacia arriba y hacia abajo y vuelva a colocar el tubo en el imán de separación celular durante 2-4 minutos más. 9. Con el tubo en el imán de separación celular, aspire con cuidado el sobrenadante y deséchelo. 10. Repita los pasos 8 y 9. 11. Tras el último lavado, resuspenda la fracción positiva en un tampón o medio adecuado y proceda con las aplicaciones posteriores deseadas. *Consejos para una preparación celular exitosa: Extraiga la sangre en un tubo con EDTA. Retire el plasma rico en plaquetas centrifugando una vez a 220-240 × g. Lave 2-3 veces en PBS después de la separación por gradiente de densidad. Retire los grumos de células o los residuos pasando la suspensión a través de un filtro de células de nailon de 70 µm. † Es posible que sea necesario titular las partículas BD IMag™ para optimizar la separación de los leucocitos del macaco rhesus. ‡ Evite el etiquetado no específico trabajando rápidamente y respetando los tiempos de incubación recomendados.
Avisos del producto: Las partículas BD IMag™ se preparan a partir de partículas magnéticas carboxifuncionalizadas, fabricadas por Skold Technology y con licencia de patente estadounidense número 7,169,618. Ficoll-Paque es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.