BD, 558217, BD Phosflow™ Alexa Fluor® 647 Rata anti-Histona H3 (pS28)

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo), Rata, Hámster, Vaca, Mosca (reportado)
Isotipo: IgG2a de rata, κ
Inmunógeno: péptido de histona humana H3 fosforilado
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 20 µl
ID de registro: AB_397065
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con Alexa Fluor® 647 en condiciones óptimas y se eliminó el Alexa Fluor® 647 que no reaccionó.
Procedimientos de ensayo recomendados: 1. Lavar la suspensión celular dos veces con PBS 1X. 2. Fijar las células añadiendo gota a gota etanol al 70 % helado mientras se agita en vórtex. Luego, conservarlas durante al menos 4 horas a -20 °C en etanol al 70 %. 3. Tomar una alícuota de aproximadamente 1 millón de células fijadas por tubo para la tinción. Lavarlas dos veces con PBS 1X y luego una vez con tampón de tinción. 4. Teñir las células con 20 μl de anti-histona H3 de rata Alexa Fluor® 647 (pS28) en 80 μl de tampón de tinción durante 20 minutos a temperatura ambiente y, a continuación, lavarlas con tampón de tinción. 5. Para un análisis óptimo del ciclo celular, las células deben tratarse con ARNasa antes de teñirlas con yoduro de propidio: • Trate las células teñidas con 50 μg de ARNasa A (Sigma R5500) en 50 μl de PBS 1X durante 30 minutos a 37 °C. Sin lavar, tiña el ADN añadiendo 5 μg de yoduro de propidio (Sigma P4170) en 450 μl de tampón de tinción durante al menos 10 minutos a temperatura ambiente. O • Tiña las células con 0,5 ml de tampón de tinción PI/ARNasa (n.º de cat. 550825) durante 15 minutos a temperatura ambiente. 6. Las células ya están listas para el análisis por citometría de flujo. Las BD™ CompBeads pueden usarse como sustitutos para evaluar el derrame de fluorescencia (compensación). Cuando los anticuerpos conjugados con fluorocromos se unen a las CompBeads, tienen propiedades espectrales muy similares a las de las células. Sin embargo, para algunos fluorocromos, puede haber pequeñas diferencias en las emisiones espectrales en comparación con las células, lo que resulta en valores de derrame que difieren de los controles biológicos. Se recomienda encarecidamente que, al utilizar un reactivo por primera vez, se compare el derrame en la célula y en CompBead para asegurarse de que las perlas BD Comp sean adecuadas para su aplicación celular específica.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). La emisión del fluorocromo Alexa Fluor® 647 se recoge con la misma configuración del instrumento que para la aloficocianina (APC). Para conocer los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Los conjugados de anticuerpos Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® de este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. exclusivamente para uso en investigación, excluyendo su uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos para analitos. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), Pacific Blue™ y Cascade Blue® están protegidos por patentes en trámite y emitidas. Este producto se proporciona bajo una licencia de propiedad intelectual entre Life Technologies Corporation y BD Businesses. La compra de este producto otorga al comprador el derecho intransferible de utilizar la cantidad adquirida del producto y sus componentes en investigaciones realizadas por el comprador (ya sea una entidad académica o con fines de lucro). El comprador no puede vender ni transferir (a) este producto, (b) sus componentes ni (c) los materiales fabricados con este producto o sus componentes a terceros, ni utilizar este producto, sus componentes ni los materiales fabricados con este producto o sus componentes con fines comerciales. Fines Comerciales significa cualquier actividad realizada por una parte a cambio de una contraprestación y puede incluir, entre otros: (1) uso del producto o sus componentes en la fabricación; (2) uso del producto o sus componentes para proporcionar un servicio, información o datos; (3) uso del producto o sus componentes con fines terapéuticos, diagnósticos o profilácticos; o (4) reventa del producto o sus componentes, independientemente de que dicho producto o sus componentes se revendan o no para su uso en investigación. Para obtener información sobre la compra de una licencia de este producto para cualquier otro uso, comuníquese con Life Technologies Corporation, Cell Analysis Business Unit Business Development, 29851 Willow Creek Road, Eugene, OR 97402, EE. UU., Tel.: (541) 465-8300. Fax: (541) 335-0504. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las hojas de datos de seguridad (SDS). Es posible que la reactividad cruzada entre especies detectada durante el desarrollo del producto no se haya confirmado en todos los formatos o aplicaciones. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.