BD, 558257, BD Pharmingen™ APC Ratón anti-CD3ε humano

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (reportada)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 20 µl
ID de registro: AB_647163
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con APC en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la APC libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Protocolo de procedimientos de ensayo recomendados para fijación, permeabilización y tinción de células PBMC 1. Coseche, cuente y sedimente las células PBMC siguiendo los procedimientos estándar. 2. Mientras agita en vórtex, agregue 5 ml de etanol frío al 70% - 80% gota a gota al sedimento celular (1-5 x 10^7 células). Incube a -20 °C durante al menos 2 horas. Estas células fijadas se pueden almacenar a -20 °C hasta 60 días antes de la tinción. 3. Lave dos veces con 30-40 ml de tampón de tinción (PBS con 1% FBS, 0,09% NaN3), centrifugue durante 10 minutos a 200 x g. 4. Resuspenda las células a una concentración de 1 x 10^7/ml. 5. Transfiera 100 µl (1 x 10^6 células) de suspensión celular a cada tubo de muestra. 6. Añada 20 µl de anticuerpo conjugado con fluorescencia debidamente diluido a los tubos anteriores. Mezcle suavemente. 7. Incube los tubos a temperatura ambiente (TA) durante 20-30 minutos en oscuridad. 8. Lave con 2 ml de tampón de tinción a 200 xg durante 5 minutos. 9. Aspire el sobrenadante. 10. Añada 0,5 ml de tampón de tinción a cada tubo. 11. Proceda al análisis por citometría de flujo.
Avisos del producto: Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Para los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Este reactivo conjugado con APC se puede usar en cualquier citómetro de flujo equipado con un láser de colorante, HeNe o diodo rojo. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las hojas de datos de seguridad (SDS). Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.