BD, 558391, Cóctel de anticuerpos contra subconjuntos de linfocitos T de ratón BD Pharmingen™, con control de isotipo; PE-Cy™7 CD3e, PE CD4 y FITC CD8

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_397079
Descripción: El cóctel de anticuerpos contra subgrupos de linfocitos T de ratón es un reactivo tricolor diseñado para identificar los principales subgrupos de linfocitos T mediante tinción inmunofluorescente directa con análisis de citometría de flujo. Este cóctel consta de la siguiente mezcla de anticuerpos: anticuerpo anti-CD3e de ratón PE-Cy7 de hámster (clon 145-2C11), anticuerpo anti-CD4 de ratón de rata PE (clon RM4-5) y anticuerpo anti-CD8a de ratón de rata FITC (clon 53-6.7). El anticuerpo 145-2C11 reacciona con la echaína de 25 kDa del complejo CD3 asociado al receptor de células T, que se expresa en timocitos, linfocitos T maduros y células NK-T de todas las cepas de ratón analizadas. El anticuerpo RM4-5 reconoce CD4 (L3T4), un antígeno de diferenciación expresado en la mayoría de los timocitos, subpoblaciones de linfocitos T maduros (es decir, células T restringidas por MHC clase II, incluyendo la mayoría de las células T auxiliares y las células T reguladoras inmunosupresoras) y un subconjunto de células NK-T en todas las cepas de ratones analizadas. También se ha detectado CD4 en células madre hematopoyéticas pluripotentes, precursores de linfocitos B y mieloides de médula ósea, precursores linfoides intratímicos y un subconjunto de células dendríticas esplénicas. El anticuerpo 53-6.7 reacciona con las cadenas α de 38 kDa y α' de 34 kDa del antígeno de diferenciación CD8 (Ly-2 o Lyt-2) expresado en la mayoría de los timocitos, subpoblaciones de linfocitos T maduros (incluidas las células T supresoras/citotóxicas restringidas por MHC de clase I y subconjuntos de células portadoras de TCR γδ y linfocitos intraepiteliales intestinales) de todas las cepas de ratón analizadas. El CD8a también se expresa en un subconjunto de células dendríticas. Los tres anticuerpos se han titulado y prediluido, mezclado y formulado para un rendimiento de tinción óptimo. El control de isotipo del subconjunto de linfocitos T de ratón contiene concentraciones equivalentes de inmunoglobulina de control negativo con fluorocromo e isotipo coincidentes. El uso de tres fluorocromos diferentes para el marcaje de los tres anticuerpos diferentes permite el reconocimiento de cada uno de los tres antígenos en cada célula de una muestra. Los niveles de expresión de los tres antígenos distinguen las principales subpoblaciones de linfocitos T en desarrollo y periféricos. Se pueden combinar reactivos adicionales marcados con fluorocromos con el cóctel de anticuerpos del subconjunto de linfocitos T de ratón y el control de isotipo del subconjunto de linfocitos T de ratón para caracterizar mejor las subpoblaciones de linfocitos T. El control de isotipo del subconjunto de linfocitos T de ratón contiene concentraciones equivalentes de inmunoglobulina de control negativo con fluorocromo e isotipo coincidentes, compuesta por: IgG1, κ de hámster armenio PE-Cy7 (clon A19-3) e IgG2a, κ de rata PE y FITC (clon R35-95).
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE libre. El anticuerpo se conjugó con PE-Cy7 en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE-Cy7 libre. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Para los espectros de fluorocromo y los ajustes adecuados del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. PE-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto de R-ficoeritrina (PE), que se excita con luz de 488 nm y sirve como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7, que actúa como aceptor de energía y fluoresce máximamente a 780 nm. La emisión del fluorocromo en tándem PE-Cy7 se recoge en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. Aunque se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, pueden observarse diferencias en la emisión residual de PE. Por lo tanto, recomendamos realizar controles de compensación individuales para cada conjugado PE-Cy7. PE-Cy7 está optimizado para su uso con un único láser de iones de argón que emite luz de 488 nm, y no existe una superposición significativa entre los espectros de emisión de PE-Cy7 y FITC. Al utilizar citómetros de doble láser, que pueden excitar directamente tanto PE como Cy7, recomendamos el uso de compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o compensación de software durante el análisis de datos. Advertencia: Algunos conjugados APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en un plazo de cuatro horas, le recomendamos que utilice el fijador estabilizador BD™ (n.º de cat. 338036). Tenga en cuenta las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que se produce en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver los viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, a la iluminación ambiental. Cy es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited. Este producto conjugado se vende bajo licencia de las siguientes patentes: Patentes estadounidenses n.º 5.486.616; 5.569.587; 5.569.766; 5.627.027. Este producto está sujeto a los derechos de propiedad de Amersham Biosciences Corp. y la Universidad Carnegie Mellon, y se fabrica y vende bajo licencia de Amersham Biosciences Corp. Este producto tiene licencia de venta únicamente para investigación. No tiene licencia para ningún otro uso. Si necesita una licencia comercial para usar este producto y no la tiene, devuelva este material sin abrir a BD Biosciences, 10975 Torreyana Rd, San Diego, CA 92121, y se le reembolsará el importe pagado. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
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