BD, 558463, Estándar de IL-5 humana de matriz de perlas citométricas (CBA) BD™

Preparación y almacenamiento: Conservar el estándar liofilizado a 4 °C antes de su reconstitución. Las liosferas de un vial de estándar de IL-5 humana, al reconstituirse en 4,0 mL de diluyente de ensayo, presentan una actividad de CBA similar a la de la IL-5 humana a una concentración de 2500 pg/mL. Tras la reconstitución, mantener la IL-5 humana a 4 °C y usar en un plazo de 12 horas. Cualquier estándar reconstituido no utilizado debe desecharse después de este período (no almacenar ni reutilizar).
Procedimientos de ensayo recomendados: El estándar de IL-5 humana se ha probado para garantizar su funcionamiento como estándar al utilizarse con la matriz de microesferas citométricas BD™ (CBA). Se recomienda a los investigadores consultar la ficha técnica del kit flexible de IL-5 humana BD™ CBA (n.° de cat. 558278) o del kit flexible de sensibilidad mejorada de IL-5 humana BD™ CBA (n.° de cat. 561511). El estándar de IL-5 humana está liofilizado y debe reconstituirse y diluirse en serie antes de mezclarlo con las microesferas de captura CBA y los reactivos de detección de PE. A continuación se proporciona un resumen de las instrucciones (Protocolo de preparación del estándar de IL-5 humana). El estándar de IL-5 humana debe reconstituirse con el diluyente de ensayo, que se incluye en el kit de tampón maestro de proteína soluble humana BD™ CBA (n.º de cat. 558264 o 558265), el kit de tampón maestro de sensibilidad mejorada humana BD™ CBA (n.º de cat. 561521 o 561523) o puede adquirirse por separado (n.º de cat. 560104). Preparación del estándar de IL-5 humana para su uso con el kit flexible de IL-5 humana BD™ CBA (n.º de cat. 558278): 1. Abra un vial del estándar de IL-5 humana liofilizado. Transfiera la(s) liosfera(s) a un tubo de polipropileno (BD Falcon™, n.º de cat. 352097). Etiquete el tubo como "Estándar superior". 2. Reconstituya el estándar con 4,0 ml de diluyente de ensayo. Deje que el estándar reconstituido se equilibre durante al menos 15 minutos antes de realizar las diluciones. Mezcle la proteína reconstituida solo con la pipeta. No agite en vórtex ni mezcle vigorosamente. 3. Etiquete 12 tubos adicionales de 75 mm (BD Falcon™, n.° de cat. 352008) y colóquelos en el siguiente orden: Estándar superior, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128 y 1:256. 4. Añada 500 µl de diluyente de ensayo a cada tubo de dilución. 5. Realice una dilución seriada transfiriendo 500 µl del Estándar superior al tubo de dilución 1:2 y mezcle bien. No agite en vórtex; mezcle solo con la pipeta. Continúe haciendo diluciones seriadas transfiriendo 500 µl del tubo 1:2 al tubo 1:4 y así sucesivamente al tubo 1:256 y mezcle bien. Prepare un tubo que contenga solo diluyente de ensayo para que sirva como control negativo de 0 pg/mL. Preparación del estándar de IL-5 humana para su uso con el BD™ CBA Human IL-5 Enhanced Sensitivity Flex Set (Cat. No. 561511): 1. Abra un vial del estándar de IL-5 humana liofilizado. Transfiera la(s) liosfera(s) a un tubo de polipropileno (BD Falcon™, Cat. No. 352097). 2. Reconstituya el estándar con 4,0 mL de diluyente de ensayo. Deje que el estándar reconstituido se equilibre durante al menos 15 minutos antes de hacer diluciones. Mezcle la proteína reconstituida solo con la pipeta. No agite en vórtex ni mezcle vigorosamente. 3. Etiquete 12 tubos adicionales de 75 mm (BD Falcon™, n.º de cat. 352008) y colóquelos en el siguiente orden: Estándar superior, 1:3, 1:9, 1:27, 1:81, 1:243 y 1:729. 4. Añada 460 µl de diluyente de ensayo al tubo del Estándar superior. 5. Añada 400 µl de diluyente de ensayo a cada uno de los tubos de dilución restantes. 6. Transfiera 40 µl del estándar reconstituido al tubo del Estándar superior. Mezcle con una pipeta o agitando suavemente en el vórtex durante no más de 3 segundos. 7. Realice una dilución seriada transfiriendo 200 µl del Estándar superior al tubo de dilución 1:3 y mezcle bien. No agite en el vórtex; mezcle solo con una pipeta. Continúe realizando diluciones seriadas transfiriendo 200 µl del tubo 1:3 al tubo 1:9 y así sucesivamente al tubo 1:729, y mezcle bien. Prepare un tubo con solo diluyente de ensayo para que sirva como control negativo de 0 fg/mL.
Avisos del producto: ProClin es una marca registrada de Rohm and Haas Company. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Advertencia: El estándar liofilizado CBA contiene 0,02 % (p/p) y el reactivo de detección (Parte A) contiene 0,002 % (p/p) de una mezcla CMIT/MIT (3:1), que consiste en: 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona [CE n.° 247-500-7] y 2-metil-4-isotiazolin-3-ona [CE n.° 220-239-6] (3:1). Indicación de peligro: Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Consejos de precaución: No se debe permitir que la ropa de trabajo contaminada salga del lugar de trabajo. Use guantes/protección ocular/facial. Use ropa de protección. Evite respirar la niebla, los vapores o el aerosol. En caso de irritación o sarpullido en la piel: Consulte a un médico. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con abundante agua. Quítese la ropa contaminada y lávela antes de volver a usarla. Deseche el contenido o el recipiente de acuerdo con la normativa local, regional, nacional e internacional.