BD, 558536, BD IMag™ Anti-Ratón Ter-119 Partículas - DM

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: Rata WI, también conocida como Wistar (exogámica) IgG2b, κ
Inmunógeno: hígado fetal de ratón
Aplicación: Separación de células (probada rutinariamente)
ID de registro: AB_647167
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. Conservar sin diluir a 4 °C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Se marca una suspensión de células de bazo o médula ósea de ratón con partículas BD IMag™ anti-TER119 de ratón - DM, según el siguiente protocolo. Esta suspensión celular marcada se coloca dentro del campo magnético del BD IMagnet (n.º de cat. 552311). Las células marcadas migran hacia el imán (fracción positiva), dejando las células no marcadas en suspensión para que puedan recolectarse (fracción agotada). A continuación, se retira el tubo del campo magnético y se añade tampón adicional para resuspender la fracción positiva. Los pasos de la separación magnética se detallan en el diagrama de flujo de separación. Tanto las fracciones agotadas como las positivas pueden evaluarse en aplicaciones posteriores, como la citometría de flujo. PROTOCOLO DE ETIQUETADO Y DEPURACIÓN MAGNÉTICA 1. Prepare el tampón BD IMag™ 1X: Diluya el tampón BD IMag™ (10X) (n.° de cat. 552362) 1:10 con agua destilada estéril o prepare solución salina tamponada con fosfato (PBS) suplementada con BSA al 0,5 %, EDTA 2 mM y azida sódica al 0,1 %. 2. Prepare una suspensión unicelular del tejido linfoide de interés según los procedimientos estándar de laboratorio. Elimine los grumos de células o residuos pasando la suspensión a través de un filtro de nailon de 70 µm. Cuente las células. 3. Lave las células con un exceso de volumen de tampón BD IMag™ 1X, centrifugue y aspire cuidadosamente todo el sobrenadante. 4. Agite bien las partículas BD IMag™ antirratón TER-119 - DM y añada 50 µl de partículas por cada 10^7 células totales. 5. Mezcle bien. Incube en el refrigerador (8 °C-11 °C, no en hielo) durante 30 minutos exactamente.* 6. Lave las células marcadas con un exceso de volumen de 10 veces el tampón BD IMag™ 1X, centrifugue a 300 xg durante 7 minutos y aspire cuidadosamente todo el sobrenadante. 7. Aumente el volumen de marcado a 20-80 x 10^6 células/ml con tampón BD IMag™ 1X. 8. Transfiera las células marcadas a un tubo de ensayo de fondo redondo de 12 x 75 mm (p. ej., BD Falcon™, n.º de cat. 352058); el volumen máximo añadido no debe superar 1,0 ml. Coloque este tubo de fracción positiva en el BD IMagnet™ (posición horizontal) durante 6 a 8 minutos.* Para un mayor volumen, transfiera las células a un tubo de ensayo de fondo redondo de 17 x 100 mm (p. ej., BD Falcon™, n.° de cat. 352057), sin exceder los 3,0 ml de volumen añadido. Coloque este tubo de fracción positiva en el BD IMagnet™ (posición vertical) durante 8 minutos.* 9. Con el tubo en el BD IMagnet™ y utilizando una pipeta Pasteur de vidrio estéril, aspire con cuidado el sobrenadante (fracción agotada) y colóquelo en un nuevo tubo estéril. 10. Retire el tubo de fracción positiva del BD IMagnet™ y añada tampón BD IMag™ 1X al mismo volumen que en el paso 7. Resuspenda el pocillo de fracción positiva pipeteando de arriba a abajo de 10 a 15 veces y vuelva a colocar el tubo en el BD IMagnet™ durante 6 a 8 minutos.* Para tubos de 17 x 100 mm: Colóquelo en el BD IMagnet™ durante 8 minutos.* 11. Con una pipeta Pasteur estéril nueva, aspire con cuidado el sobrenadante y combínelo con la fracción enriquecida del paso 9. 12. Repita los pasos 10 y 11. La fracción empobrecida combinada contiene células sin anticuerpos unidos ni partículas magnéticas. 13. Para aumentar la pureza de la fracción deplecionada combinada, coloque el tubo que contiene la fracción enriquecida combinada en el BD IMagnet™ durante 6 minutos más.* Para tubos de 17 x 100 mm: Colóquelo en el BD IMagnet™ durante 10 minutos.* 14. Aspire cuidadosamente el sobrenadante y colóquelo en un nuevo tubo estéril. Esta es la fracción deplecionada dos veces. Las células están listas para ser procesadas para aplicaciones posteriores. 15. Las células de la fracción positiva que quedan en el tubo original pueden resuspenderse en un tampón o medio de cultivo adecuado para aplicaciones posteriores, incluyendo citometría de flujo, si se desea. 16. Las muestras de la suspensión celular total y de las fracciones positiva y deplecionada deben analizarse mediante citometría de flujo para evaluar la eficiencia del procedimiento de separación celular. NOTAS: Consejos para una preparación celular exitosa: Después del lavado final, resuspenda las células a una concentración relativamente alta en tampón BD IMag™ 1X y proceda al paso 3. Se recomienda encarecidamente realizar el paso 13 para asegurar una mayor tasa de depleción. * Evite el marcaje inespecífico trabajando rápidamente y adhiriéndose a los tiempos de incubación recomendados. La concentración de BD IMag™ anti-mouse TER-119 Particles - DM sugerida en el protocolo se ha optimizado para la purificación de células de linaje eritroide TER-119-positivas a partir de células de bazo. Al marcar poblaciones de células diana presentes en frecuencias más bajas, se pueden usar menos partículas BD IMag™. Por el contrario, al marcar poblaciones de células diana que están presentes en frecuencias más altas, se deben usar más partículas. Para determinar la concentración óptima de BD IMag™ anti-mouse TER-119 Particles - DM para una aplicación particular, se recomienda una titulación en incrementos de dos veces.
Avisos del producto: Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Las partículas BD IMag™ se preparan a partir de partículas magnéticas carboxifuncionalizadas, fabricadas por Skold Technology y registradas bajo la patente estadounidense número 7,169,618.