BD, 558616, BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 488 Ratón anti-Ki-67

Nombre alternativo: MKI67; Antígeno identificado por el anticuerpo monoclonal Ki-67; KIA
Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo), Rata, Rhesus (reportado)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: Ki-67 humano
Aplicación: Bioimagen (Probada rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_647087
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con Alexa Fluor® 488 en condiciones óptimas y se eliminó el Alexa Fluor® 488 que no reaccionó.
Procedimientos de ensayo recomendados: 1. Siembre las células en un medio de cultivo adecuado a una concentración de ~10 000 células por pocillo en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y fije las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incubándolo durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y permeabilice las células con metanol frío o Triton™ X-100: a. Añadir 100 µl de metanol al 90 % a -20 °C o tampón de permeación BD Phosflow™ III a -20 °C (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. O b. Añadir 100 µl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Triton es una marca registrada de The Dow Chemical Company. 4. Retirar el permeabilizador y lavar los pocillos dos veces con 100 µl de PBS 1×. 5. Retirar el PBS y bloquear las células añadiendo 100 µl de tampón de bloqueo (FBS al 3 % en PBS 1×) o tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) a cada pocillo e incubando durante 30 minutos a temperatura ambiente. 6. Retire el tampón de bloqueo, diluya el conjugado de anticuerpo 1:10 en tampón de bloqueo o tampón de tinción (FBS) y tiña las células añadiendo 50 µl del conjugado de anticuerpo diluido a cada pocillo e incubando durante 1 hora a temperatura ambiente. 7. Retire el conjugado de anticuerpo diluido y lave los pocillos tres veces con 100 µl de PBS 1×. 8. Retire el PBS y contratine los núcleos añadiendo 100 µl de una solución de 2 µg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich Cat. N.º B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la obtención de la imagen. 9. Observe y analice las células en un instrumento de obtención de imágenes adecuado.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso en el volumen recomendado por prueba cuando se sigue el procedimiento de ensayo recomendado. Una prueba es típicamente ~10,000 células cultivadas en un pocillo de una placa de imágenes de 96 pocillos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. La reactividad cruzada de especies detectada en el desarrollo del producto puede no haber sido confirmada en todos los formatos y/o aplicaciones. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Los conjugados de anticuerpos de colorante Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® en este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. solo para uso en investigación, excluyendo el uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos de analito. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), Pacific Blue™ y Cascade Blue® están protegidos por patentes en trámite y concedidas. La emisión del fluorocromo Alexa Fluor® 488 se obtiene con la misma configuración del instrumento que para el isotiocianato de fluoresceína (FITC). Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Para consultar los protocolos técnicos, visite www.bdbiosciences.com/us/s/resources.