BD, 558686, BD Pharmingen™ Anti-GATA3 de ratón purificado

Reactividad: Humano, Ratón (Prueba de control de calidad), Rata (Predicha)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG1, κ
Inmunógeno: péptido conservado entre los dominios de transactivación y unión al ADN de GATA3 humano, de ratón y de rata.
Aplicación: Western blot (probado rutinariamente), bioimagen, inmunohistoquímica-formalina (requiere recuperación de antígeno) (probado durante el desarrollo)
Peso molecular objetivo: 50 kDa
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_2108590
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Procedimiento con metanol para una placa de 96 pocillos, con contratinción nuclear: 1. Siembre las células en un medio de cultivo adecuado a ~10 000 células por pocillo en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y fije las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incubándolo durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y permebilice las células añadiendo 100 µl de metanol al 90 % a -20 °C o tampón de permeación BD™ Phosflow III a -20 °C (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incubándolos durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Retire el permeabilizador y lave los pocillos dos veces con 100 µl de PBS 1×. 5. Retire el PBS y bloquee las células añadiendo 100 µl de tampón de bloqueo (3 % FBS en PBS 1×) o tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) a cada pocillo e incubándolos durante 30 minutos a temperatura ambiente. 6. Retire el tampón de bloqueo, diluya el anticuerpo en tampón de bloqueo o tampón de tinción (FBS) y tiña las células añadiendo 50 µl del anticuerpo diluido a cada pocillo e incubando durante 1 hora a temperatura ambiente. 7. Retire el anticuerpo diluido y lave los pocillos tres veces con 100 µl de PBS 1×. 8. Retire el PBS, diluya el reactivo de segundo paso en tampón de bloqueo o tampón de tinción (FBS) y tiña las células añadiendo 50 µl del reactivo de segundo paso diluido a cada pocillo e incubando durante 1 hora a temperatura ambiente. 9. Retire el reactivo de segundo paso diluido y lave los pocillos tres veces con 100 µl de PBS 1×. 10. Retire el PBS y realice una contratinción de los núcleos añadiendo 100 μl de una solución de 2 μg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich, n.º de cat. B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la adquisición de la imagen. 11. Observe y analice las células en un instrumento de adquisición de imagen adecuado. Bioimagen: Para obtener más información, consulte http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp. Western blot: Para obtener más información, consulte http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml.
Avisos del producto: Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para aplicaciones de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para obtener un rendimiento óptimo.