BD, 558709, BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 647 Ratón anti-citocromo c

Reactividad: Humano (prueba de control de calidad), ratón, rata (reactividad confirmada en desarrollo)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG1, κ
Inmunógeno: Citocromo c de rata
Aplicación: Bioimagen (Probada rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_1645616
Tampón de almacenamiento: solución tamponada acuosa que contiene BSA, estabilizador de proteínas y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con Alexa Fluor® 647 en condiciones óptimas y se eliminó el Alexa Fluor® 647 no reaccionado. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: 1. Siembre las células en un medio de cultivo adecuado a una concentración de ~10 000 células por pocillo en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y fije las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incubándolo durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y permeabilice las células con metanol frío o Triton™ X-100: a. Añadir 100 µl de metanol al 90 % a -20 °C o tampón de permeación BD™ Phosflow III a -20 °C (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. O b. Añadir 100 µl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Triton es una marca registrada de The Dow Chemical Company. 4. Retirar el permeabilizador y lavar los pocillos dos veces con 100 µl de PBS 1×. 5. Retirar el PBS y bloquear las células añadiendo 100 µl de tampón de bloqueo (FBS al 3 % en PBS 1×) o tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) a cada pocillo e incubando durante 30 minutos a temperatura ambiente. 6. Retire el tampón de bloqueo, diluya el conjugado de anticuerpo 1:10 en tampón de bloqueo o tampón de tinción (FBS) y tiña las células añadiendo 50 µl del conjugado de anticuerpo diluido a cada pocillo e incubando durante 1 hora a temperatura ambiente. 7. Retire el conjugado de anticuerpo diluido y lave los pocillos tres veces con 100 µl de PBS 1×. 8. Retire el PBS y contratine los núcleos añadiendo 100 µl de una solución de 2 µg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich Cat. N.º B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la obtención de la imagen. 9. Observe y analice las células en un instrumento de obtención de imágenes adecuado. Los filtros recomendados para los instrumentos BD Pathway™ son: Instrumento Excitación Emisión Dicroico BD Pathway 855 620/60 700/75 660 LP BD Pathway 435 628/40 690/40 FF660
Avisos del producto: Avisos del producto Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Este reactivo ha sido prediluido para su uso en el volumen recomendado por prueba cuando se sigue el procedimiento de ensayo recomendado. Una prueba suele ser de ~10 000 células cultivadas en un pocillo de una placa de imágenes de 96 pocillos. Los conjugados de anticuerpos de los colorantes Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® de este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. solo para uso en investigación, excluyendo el uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos de analitos. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), el colorante Pacific Blue™ y el colorante Cascade Blue® están cubiertos por patentes pendientes y emitidas. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA, ubicados en Estados Unidos. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR.