BD, 559329, BD Pharmingen™ PE Anti-IL-12 humana de ratón (p40/p70)

Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgG1 de ratón
Inmunógeno: heterodímero p70 de IL-12 humana recombinante expresado en CHO
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 20 µl
ID de registro: AB_397226
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE libre. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Tinción inmunofluorescente y análisis por citometría de flujo: El anticuerpo C11.5 es útil para la tinción inmunofluorescente y el análisis por citometría de flujo para identificar y enumerar células productoras de IL-12 en poblaciones celulares mixtas. Esta formulación de 100 muestras del anticuerpo C11.5 conjugado con PE ha sido pretitulada para asegurar una detección intracelular eficaz de IL-12 humana utilizando 20 µl/1 x 10 e6 células. Un control útil para demostrar la especificidad de la tinción es cualquiera de los siguientes: 1) prebloquear el anticuerpo C11.5 conjugado con fluorocromo con ligando en exceso (por ejemplo, IL-12 p70 humana recombinante, (Cat. No. 554613) o IL-12 p40 humana recombinante, (Cat. No. 554633) antes de la tinción, o 2) prebloquear las células fijadas/permeabilizadas con anticuerpo C11.5 no marcado (Cat. No. 554573) antes de la tinción. La técnica de tinción intracelular y el uso de controles de bloqueo se describen en detalle por C. Prussin y D. Metcalfe. Un control de isotipo IgG1 de ratón adecuado para evaluar el nivel de tinción de fondo en células humanas fijadas con paraformaldehído/permeabilizadas con saponina también está disponible en una formulación de tamaño de prueba 100 PE-MOPC-21 (Cat. No. 559320). Nota importante: Esta solución de anticuerpos pretitulados no contiene agente de permeabilización celular. Es necesario incluir un agente de permeabilización celular al utilizarla para teñir células fijadas y permeabilizadas. El tampón BD Perm/Wash™ (n.° de cat. 554723) contiene saponina, agente de permeabilización, y es útil para este fin, como se describe en la sección de Uso. Uso: 1. Resuspender 1 x 10⁻¹ células fijadas y permeabilizadas en 20 µl de la solución de anticuerpos pretitulados y 30 µl de tampón BD Perm/Wash 1X (n.° de cat. 554723). 2. Incubar la suspensión celular durante 15 minutos (a temperatura ambiente o 4 °C). 3. Lavar dos veces con 100 µl de tampón BD Perm/Wash 1X (n.° de cat. 554723).
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Ficoll-Paque es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited.