BD, 559332, BD Pharmingen™ PE Anti-IL-5 humana para ratas

Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgG2a de rata
Inmunógeno: IL-5 humana recombinante
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 20 µl
ID de registro: AB_397229
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE libre. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Tinción inmunofluorescente y análisis de citometría de flujo: El anticuerpo JES1-39D10 es útil para la tinción inmunofluorescente y el análisis de citometría de flujo para identificar y enumerar células productoras de IL-5 humana en poblaciones celulares mixtas. El anticuerpo JES1-39D10 conjugado con PE es especialmente adecuado para estos experimentos (véase la figura). Esta formulación de 100 muestras del anticuerpo JES1-39D10 conjugado con PE ha sido pretitulada para asegurar una detección intracelular eficaz de IL-5 humana utilizando 20 µl/1 x 10e6 células. Para conocer la metodología específica, visite nuestro sitio web, www.bdbiosciences.com, y consulte la sección de protocolos o el capítulo sobre tinción intracelular del Manual de Función Inmunitaria. Un control útil para demostrar la especificidad de la tinción es uno de los siguientes: 1) prebloquear el anticuerpo PE-JES1-39D10 con un exceso de ligando (p. ej., IL-5 humana, n.º de cat. 554606) antes de la tinción, o 2) prebloquear las células fijadas con paraformaldehído/permeabilizadas con saponina con el anticuerpo JES1-39D10 no marcado (p. ej., n.º de cat. 554488) antes de la tinción. La técnica de tinción intracelular y el uso de controles de bloqueo se describen en detalle en C. Prussin y D. Metcalfe. También está disponible un control de isotipo IgG2a de rata adecuado para evaluar el nivel de tinción de fondo en células humanas o de ratón fijadas con paraformaldehído/permeabilizadas con saponina en una formulación de tamaño de prueba 100 PE-R35-95 (n.º de cat. 559317). Nota importante: Esta solución de anticuerpo pretitulada no contiene un agente de permeabilización celular. Es necesario incluir un agente de permeabilización celular al utilizar la solución de anticuerpos pretitulados para teñir células fijadas y permeabilizadas. El tampón Perm/Wash™ (n.° de cat. 554723) contiene saponina, agente de permeabilización, y es útil para este propósito, como se describe en la sección de Uso. USO 1. Resuspender 1 x 10⁻¹ células fijadas y permeabilizadas en 20 µl de la solución de anticuerpos pretitulados y 30 µl de tampón Perm/Wash™ 1X (n.° de cat. 554723). 2. Incubar la suspensión celular durante 15 minutos (a temperatura ambiente o a 4 °C). 3. Lavar dos veces con 100 µl de tampón Perm/Wash™ 1X (n.° de cat. 554723).
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Para obtener espectros de fluorocromo y configuraciones adecuadas del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos.