BD, 559337, BD Pharmingen™ PE Anti-IL-10 humana y viral de rata

Reactividad: Humana (Prueba de control de calidad), Viral (Probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 de rata
Inmunógeno: IL-10 humana recombinante
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 20 µl
ID de registro: AB_397232
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE libre. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Tinción inmunofluorescente y análisis por citometría de flujo: El anticuerpo JES3-9D7 conjugado con PE puede utilizarse para la tinción inmunofluorescente multicolor y el análisis por citometría de flujo para identificar y enumerar células productoras de IL-10 en poblaciones celulares mixtas (véase la imagen). Esta formulación de 100 muestras del anticuerpo JES3-9D7 conjugado con PE ha sido pretitulada para asegurar la detección intracelular eficaz de IL-10 humana y viral utilizando 20 µl/1 x 10^6 células. Un control útil para demostrar la especificidad de la tinción es uno de los siguientes: 1) prebloquear el anticuerpo JES3-9D7 conjugado con ligando (IL-10 humana recombinante; n.º de cat. 554611) antes de la tinción, o 2) prebloquear las células fijadas/permeabilizadas con el anticuerpo JES3-9D7 no marcado (n.º de cat. 554496) antes de la tinción. La técnica de tinción y el uso de controles de bloqueo se describen en detalle en C. Prussin y D. Metcalfe. También está disponible un control de isotipo de IgG1 de rata adecuado para evaluar el nivel de tinción de fondo en células humanas fijadas con paraformaldehído/permeabilizadas con saponina en una formulación de tamaño de prueba 100 PE-R3-34 (n.º de cat. 559318). Para conocer la metodología específica, visite la sección de protocolos o el capítulo sobre tinción intracelular del Manual de Función Inmunitaria, ambos publicados en nuestro sitio web, www.bdbiosciences.com. Nota importante: Esta solución de anticuerpos pretitulados no contiene agente de permeabilización celular. Es necesario incluir un agente de permeabilización celular al utilizarla para teñir células fijadas y permeabilizadas. El tampón Perm/Wash™ (n.º de cat. 554723) contiene saponina, agente de permeabilización, y es útil para este propósito, como se describe en la sección de USO a continuación. USO 1. Resuspenda 1 x 10^6 células fijadas y permeabilizadas en 20 µl de la solución de anticuerpos pretitulados y 30 µl de tampón Perm/Wash™ 1X (n.º de cat. 554723). 2. Incube la suspensión celular durante 15 minutos (a temperatura ambiente o a 4 °C). 3. Lavar dos veces en 100 µl de tampón Perm/Wash™ 1X (n.º de cat. 554723).
Avisos del producto: Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Para los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías.