BD, 560044, BD Pharmingen™ Anti-FoxP3 humano purificado de ratón

Nombre alternativo: scurfin; IPEX; JM2; AIID; XPID; DIETER; PIDX
Reactividad: Humano (prueba de control de calidad), Rhesus, Cynomolgus, Babuino (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 BALB/c de ratón
Inmunógeno: FoxP3
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (probada rutinariamente), inmunohistoquímica, Western blot (reportado)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_1645589
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Procedimientos de preparación celular y tinción para anticuerpo anti-FoxP3 humano purificado 1. Lleve los tampones a temperatura ambiente (TA) antes de usar. Prepare soluciones de trabajo del juego de tampones BD Pharmingen Human FoxP3, n.º de cat. 560098 (para las preparaciones de los tampones A y C, consulte la TDS de las instrucciones del tampón n.º de cat. 560098 para obtener más información). 2. Prepare PBMC humanas. Calcule las células necesarias por prueba, (1,2 millones) PBMC. 3. Fije las células a granel o el tamaño de la prueba utilizando 2 ml de solución de trabajo 1x Human FoxP3 Buffer A por prueba, incube durante 10 min. a TA, protegido de la luz. Nota: Las PBMC fijadas a granel se pueden congelar a -80 °C durante 24 horas antes de continuar con el paso 4. 4. Lave con 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* por prueba. Centrifugue a 500 xg durante 10 minutos y retire el tampón de lavado. 5. Para permeabilizar las células a granel o en tamaño de prueba, agregue 0,5 ml por prueba de solución de trabajo 1x Human FoxP3 Buffer C por prueba, incube durante 30 minutos, protegido de la luz. 6. Agregue 2 ml adicionales de BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* por prueba. Centrifugue a 500 xg durante 10 minutos y retire el tampón de lavado. 7. Resuspenda las células en BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)* a 100 µl/prueba; alícuota 100 µl de suspensión celular por tubo de 12 x 75 mm. 8. Agregue mAb anti-FoxP3 humano purificado a concentraciones apropiadas a 20 µl/prueba en los tubos. Agite suavemente o agite en vórtex. Incube durante 30 minutos a TA, protegido de la luz. 9. Lave las células dos veces añadiendo 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* a cada tubo y centrifugue a 500 xg durante 5 minutos a TA. Retire el tampón de lavado. 10. Añada el anticuerpo secundario (APC Rat Anti-Mouse IgG1, n.º de cat. 550874) a la concentración adecuada. Incube durante 30 minutos a TA protegido de la luz. 11. Repita el lavado como en el paso 9. 12. Bloquee el secundario con suero de ratón normal 1:10 en PBS 1x, 100 µl por prueba. Incube durante 10 minutos a TA. 13. Añada volúmenes de prueba de mAb de superficie antihumanos, incube durante 20 minutos a TA, protegido de la luz. 14. Añada 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* a cada tubo y centrifugue a 500 xg durante 5 minutos a TA y retire el tampón de lavado. 15. Resuspender en tampón de lavado y analizar inmediatamente. Opcional: Añadir 300 µl de formaldehído al 1 % en PBS 1x y almacenar a 4 °C. Analizar las células en un plazo de 24 horas. Nota: Precaución: El sedimento flota tras la fijación y se requiere especial atención para evitar la aspiración de las células. * Recomendamos utilizar el tampón de tinción BD Pharmingen (FBS; n.° de cat. 554656) para la tinción inicial de la superficie y todos los pasos de lavado, y cubrir los tubos con tapas o parafilm durante la incubación. También recomendamos optimizar los voltajes de dispersión frontal y lateral para visualizar los linfocitos separados de los residuos, los fantasmas de eritrocitos y/o las plaquetas antes de la adquisición. ** Adquirir al menos entre 15 000 y 25 000 linfocitos CD4 positivos.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.