BD, 560082, BD Pharmingen™ PE Ratón anti-FoxP3 humano

Nombre alternativo: scurfin; IPEX; JM2; AIID; XPID; DIETER; PIDX
Reactividad: Humano (prueba de control de calidad), Rhesus, Cynomolgus, Babuino (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 BALB/c de ratón
Inmunógeno: FoxP3
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 20 µl
ID de registro: AB_1645508
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación celular y procedimientos de tinción para anticuerpo anti-FoxP3 humano conjugado 1. Lleve los tampones a TA (temperatura ambiente) antes de usar. Prepare soluciones de trabajo del juego de tampones BD Pharmingen Human FoxP3, n.º de cat. 560098. (Para preparaciones de tampón A y C, consulte la TDS del n.º de cat. 560098 para obtener más información). 2. Prepare PBMC humanas. Diluya las células con tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* a 1 X 10^7 células/ml. 3. Pipetee la cantidad apropiada de reactivo de tinción de superficie en el fondo de cada tubo de 12 x 75 mm. 4. Agregue 100 µl de células por tubo, agite en vórtex e incube durante 20 minutos a TA protegido de la luz. 5. Agregue 2 ml de tampón de lavado. Centrifugue a 250 xg durante 10 minutos y retire el tampón de lavado. 6. Para fijar las células, resuspenda suavemente el pellet en el volumen residual del tampón de lavado y luego agregue 2 ml de tampón A 1x Human FoxP3. Mezcle en vórtex. Incube durante 10 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. 7. Centrifugue a 500 xg durante 5 minutos y retire el fijador. Precaución: Tenga en cuenta que el pellet flota. 8. Para lavar las células, resuspenda cada pellet en 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* y centrifugue a 500 xg durante 5 minutos. Retire el tampón de lavado. 9. Para permeabilizar las células, resuspenda suavemente el pellet en el volumen residual del tampón de lavado y luego agregue 0,5 ml de solución de trabajo 1x de tampón C Human FoxP3 a cada tubo. Mezcle en vórtex. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente protegido de la luz. 10. Para lavar las células, añadir 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* a cada tubo, centrifugar a 500 xg durante 5 minutos a temperatura ambiente. Retirar el tampón y repetir el paso de lavado. Retirar el tampón. 11. Añadir el anticuerpo FoxP3 conjugado a las concentraciones adecuadas para resuspender el pellet. Agitar suavemente o mezclar con vórtex. 12. Incubar durante 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente. 13. Repetir el paso de lavado n.º 10. 14. Resuspender en el tampón de lavado y analizar inmediatamente. Opcional: Añadir 300 µl de formaldehído al 1 % en PBS 1x y almacenar a 4 °C. Analizar las células en un plazo de 24 horas. * Recomendamos utilizar el tampón de tinción BD Pharmingen (FBS; n.º de cat. 554656) para todos los pasos de lavado y cubrir los tubos durante los pasos de incubación con tapas o parafilm. También recomendamos optimizar los voltajes de dispersión frontal y lateral para visualizar los linfocitos separados de los restos, los fantasmas de glóbulos rojos y/o las plaquetas antes de la adquisición. ** Adquiera al menos entre 15 000 y 25 000 linfocitos CD4 positivos.
Avisos del producto: Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente utilizamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Para obtener información sobre los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.