BD, 560089, BD Pharmingen™ APC IgG1 de rata antirratón

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: LOU de rata, también conocida como Louvain, LOU/C, LOU/M IgG1, κ
Inmunógeno: IgG1 de ratón agrupada
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente), tinción intracelular (citometría de flujo) (probada durante el desarrollo)
Concentración: 0,2 mg/ml
ID de registro: AB_1645625
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con APC en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la APC libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: El anticuerpo A85-1 conjugado con APC puede utilizarse como reactivo primario o secundario en la tinción inmunofluorescente. PROTOCOLO PARA LA TINCIÓN INMUNOFLUORESCENTE DE INMUNOGLOBULINA (Ig) INTRACELULAR: 1. Prepare una suspensión unicelular y determine el número de células. 2. Suspenda las células en el tampón de tinción (PBS + 2 % FBS + 0,1 % azida sódica) a una concentración de 2 x 10^7 células/ml y transfiéralas a microplacas de fondo en U a 50 µl/pocillo para la tinción inmunofluorescente. Nota: El tampón de tinción BD Pharmingen™ con FBS (n.º de cat. 554656) es eficaz como tampón de tinción en este protocolo. 3. Bloquee los receptores Fcγ añadiendo 0,2 µg de anticuerpo 2.4G2 purificado (Mouse BD Fc Block™ mAb anti-CD16/CD32 de ratón purificado 2.4G2) (n.º de cat. 553141/553142) en 50 µl de tampón de tinción a cada pocillo. 4. Incube 5 minutos en hielo. 5. Añada 200 µl de tampón de tinción por pocillo y resuspenda las células. Centrifugue a 250 xg durante 5 minutos y aspire el sobrenadante. 6. Bloquee la Ig de superficie con el mAb A85-1 purificado (n.º de cat. 553440) añadiendo 1,0 µg por muestra en 50 µl de tampón de tinción por pocillo. Nota: Los marcadores de superficie pueden teñirse durante este paso, como se describe en la sección "Tinción inmunofluorescente de leucocitos de ratón y rata para citometría de flujo" de la sección "Protocolos técnicos" de nuestro sitio web: http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/mouse_rat_leukocytes.jsp. 7. Incubar durante 15 minutos en hielo. 8. Lavar dos veces, como se describe en el paso 5. 9. Resuspender las células en 100 µl de tampón de tinción intracelular BD Cytofix/Cytoperm™ (kit BD Cytofix/Cytoperm™, n.º de cat. 554714) por pocillo. 10. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. 11. Lavar dos veces con 200 µl de tampón de perfusión/lavado 1x (incluido en el kit BD Cytofix/Cytoperm) por pocillo. Centrifugue a 250 xg durante 5 minutos y aspire el sobrenadante entre lavados. 12. Tiña la Ig intracelular añadiendo ≤1 µg de mAb A85-1 conjugado con APC en 50 µl de 1 x tampón de lavado/permeabilización/pocillo. Nota: Se pueden añadir otros anticuerpos recomendados para la tinción de marcadores intracelulares durante este paso, como se describe en el paso 12. 13. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 14. Lave 2 veces como se describe en el paso 11. 15. Resuspenda y transfiera las muestras en 100 µl de tampón de tinción a tubos adecuados para el análisis con un citómetro de flujo. Lleve el volumen de cada tubo a 400 µl con tampón de tinción. 16. Analice las muestras en un citómetro de flujo.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Este reactivo conjugado con APC puede utilizarse en cualquier citómetro de flujo equipado con láser de colorante, HeNe o diodo rojo. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para obtener información sobre los protocolos técnicos.