BD, 560235, BD Pharmingen™ Anti-TAZ de ratón purificado

Nombre alternativo: WWTR1
Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG2b, κ
Inmunógeno: proteína recombinante TAZ humana
Aplicación: Western blot (probado rutinariamente), bioimagen (probado durante el desarrollo)
Peso molecular objetivo: 49 kDa
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_1645338
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. Conservar sin diluir a 4 °C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Para obtener más información, consulte: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml y Bioimaging: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Bioimaging_Certified.shtml Protocolo recomendado para Bioimaging: 1. Siembre las células en un medio de cultivo apropiado a una densidad celular apropiada en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche a 48 horas. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y lave (una o dos veces) con 100 µl de PBS 1×. 3. Fije las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incubándolos durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 4. Retire el fijador de los pocillos y lávelos (una o dos veces) con 100 µl de PBS 1×. 5. Permeabilice las células utilizando metanol frío (a), Triton™ X-100 (b) o saponina (c): a. Añada 100 µl de metanol al 90 % a -20 °C o tampón de permeación BD™ Phosflow III a -20 °C (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incube durante 5 minutos a TA. b. Añadir 100 µl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. c. Añadir 100 µl de tampón de permeabilización/lavado 1× (n.º de cat. 554723) a cada pocillo e incubar de 15 a 30 minutos a temperatura ambiente. Seguir utilizando el tampón de permeabilización/lavado 1× en todos los lavados y diluciones posteriores. 6. Retirar el tampón de permeabilización de los pocillos y lavar una o dos veces con 100 µl del tampón adecuado (PBS 1× o tampón de permeabilización/lavado 1×; véase el paso 5.c). 7. Paso de bloqueo opcional: Retire los tampones de lavado y bloquee las células añadiendo 100 µl de tampón de bloqueo BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (n.º de cat. 554656) o FBS al 3 % en el tampón de dilución adecuado a cada pocillo e incubando de 15 a 30 minutos a temperatura ambiente. 8. Diluya el anticuerpo hasta su concentración de trabajo óptima en el tampón de dilución adecuado. Titule los anticuerpos purificados (no conjugados) y los reactivos del segundo paso para determinar la concentración óptima. Si utiliza un conjugado de anticuerpo certificado por Bioimaging, dilúyalo 1:10. 9. Añada 50 µl de anticuerpo diluido por pocillo e incube durante 60 minutos a temperatura ambiente. Incube en la oscuridad si utiliza anticuerpos marcados con fluorescencia. 10. Retire el anticuerpo y lave los pocillos tres veces con 100 µl de tampón de lavado. Se puede incluir un lavado con detergente opcional (100 µl de Tween al 0,05 % en PBS 1×) antes de los pasos de lavado habituales. 11. Si el anticuerpo que se utiliza está marcado con fluorescencia, pase al paso 12. De lo contrario, si utiliza un anticuerpo purificado sin marcar, repita los pasos 8 a 10 con un reactivo de segundo paso marcado con fluorescencia para detectar el anticuerpo purificado. 12. Después del lavado final, contratine los núcleos añadiendo 100 µl de una solución de 2 µg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich Cat. N.º B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la obtención de imágenes. 13. Observe y analice las células en un instrumento de obtención de imágenes adecuado.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para la aplicación de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para un rendimiento óptimo.